В чем заключается порядок приготовления культуральных сред
Приготовление культуральных сред
Питательные среды для посева и роста микробов готовят в определенной последовательности:
– установление оптимальной кислотности рН;
– осветление и фильтрация;
Варка.
Приготовление плотных сред – дело весьма простое: стоит только к любой из жидких органических сред, приготовленных в соответствии с рецептами, добавить 10% желатины (пока среда горячая) или 1,3-2 % агара.
Посуда для приготовления питательных сред не должна содержать посторонних веществ, например, щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов железа, которые могут попасть в среду при варке ее в ржавых кастрюлях. Лучше всего пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой посудой. Большие количества среды (десятки и сотни литров) готовят в специальных варочных котлах или реакторах. Перед употреблением посуду необходимо тщательно вымыть, прополоскать и высушить. Новую стеклянную посуду предварительно кипятят 30 мин в 1-2 %-м растворе хлорводородной кислоты или погружают в этот раствор на ночь, после чего в течение часа полощут в проточной воде. (Посудой, предназначенной для приготовления сред, нельзя пользоваться в других целях, например, для хранения химических реактивов или дезинфицирующих растворов, – даже следы этих веществ могут помешать росту микроорганизмов.)
Исходным сырьем для приготовления большинства сред служат продукты животного или растительного происхождения: мясо и его заменители, молоко, яйца, картофель, соя, кукуруза, дрожжи и др.
Основные питательные бульоны для роста культуры готовят на мясной воде или на различных переварах, полученных при кислотном или ферментативном гидролизе исходного сырья. Бульоны из переваров в 5-10 раз экономичнее, чем из мясной воды. Среды на переварах богаче аминокислотами, следовательно, питательнее, и обладают большей буферностью, т.е. имеют более стабильную величину рН. Кроме того, препараты можно готовить из заменителей мяса (сгустков крови, плаценты, казеина и т.д.). Чаще используют панкреатический перевар Хоттингера, гидролизаты казеина или кормовых дрожжей. Из полуфабрикатов по определенным рецептам готовят необходимые среды.
Варят среды на открытом огне, водяной бане, в автоклаве или варочных котлах, подогреваемых паром.
Устанавливают кислотность рН сред ориентировочно с помощью индикаторных бумажек. Для точного определения рН используют потенциометр.
Разливают среды в пробирки (по 3-5 или 10 мл), флаконы, колбы, матрицы и бутылки не более чем на 2/3 емкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность. Среды, которые стерилизуют при температуре выше 100 °С, разливают в чистую сухую посуду. Среды, стерилизуемые при более низкой температуре, обязательно разливают в стерильную посуду.
Разливают среды с помощью воронки, на конец которой надета резиновая трубка с зажимом Мора. Для мерного разлива применяют мензурки, бюретки, дозаторы, шприцы-пипетки и т. п.
Посуду со средой обычно закрывают ватно-марлевыми пробками, поверх которых надевают бумажные колпачки. Важно, чтобы при разливе среда не смачивала края посуды, иначе к ним могут прилипнуть пробки. К каждому сосуду обязательно прикрепляют этикетку с названием среды и той ее приготовления.
Контроль готовых сред.
1 Для контроля стерильности среды ставят в термостат на 2 суток, после чего их просматривают. Если на средах не появятся признаки роста, их считают стерильными и передают для химического контроля несколько образцов каждой серии;
2 Химический контроль: окончательно устанавливают рН, содержание общего и аминного азота, пептона, хлоридов (их количество должно соответствовать указанному в рецепте). Химический контроль сред производят в химической лаборатории;
Хранят среды при комнатной температуре в шкафах, желательно специально для них предназначенных. Некоторые среды, например, среды с кровью и витаминами, хранят в холодильнике.
Дата добавления: 2018-11-24 ; просмотров: 265 ; Мы поможем в написании вашей работы!
В чем заключается порядок приготовления культуральных сред
ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред
Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории
Microbiology of food and animal feeding stuffs. Guidelines on preparation and production of culture media. Part 1. General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory
ОКС 07.100.30
ОКСТУ 9209
9210
Дата введения 2010-01-01
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным учреждением «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф.Гамалеи» Российской академии медицинских наук на основе русской версии стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»
Введение
Эти три критерия являются важной частью внутреннего контроля качества и при наличии соответствующей документации позволяют осуществлять эффективный контроль культуральных сред, чтобы обеспечивать получение точных и объективных результатов.
1 Область применения
В настоящем стандарте предоставлена общая терминология, связанная с обеспечением качества приготовления культуральных сред, и установлены минимальные требования, которые следует использовать для микробиологического анализа продуктов, предназначенных для потребления в пищу и корма для животных.
Эти требования применимы к трем категориям культуральных сред, используемых в лабораториях, которые готовят и/или используют культуральные среды для выполнения микробиологических исследований:
— коммерческим средам, готовым к использованию;
— средам, приготовленным от индивидуальных ингредиентов.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ЕН 1659:1996 Системы для диагностики in vitro. Культуральные среды для микробиологических целей. Термины и определения.
ЕН 12322:1999 Средства медицинские для диагностики in vitro. Культуральные среды для микробиологических целей. Критерии эффективности культуральных сред.
ИСО 8402:1994 Управление качеством и обеспечение качества. Словарь.*
* Стандарт в настоящее время пересматривается и будет объединен с ИСО 9000-1:1994 с целью создания ИСО 9000:2000 «Системы менеджмента качества. Основные положения и словарь».
3 Терминология
3.1 Общие положения
В этом разделе приводятся общие определения, связанные с обеспечением качества, и различные термины, касающиеся питательных сред и выращивания культур. Стандарты, приведенные в скобках, указывают на то, что данный текст идентичен тексту из этих стандартов.
3.2 Термины по обеспечению качества
3.2.1 обеспечение качества: Все виды плановой и систематической деятельности, осуществленные в пределах системы качества и считающиеся необходимыми для обеспечения адекватных условий, которые обеспечивают требования по качеству
3.2.2 контроль качества: Операционные методы и деятельность персонала для выполнения требований по качеству
3.2.3 внутренний контроль качества: Непрерывная программа контроля работы лаборатории, подготовленная самой лабораторией или для нее основанная на анализе контроля качества с корректировкой исполнения, если это необходимо.
3.2.4. партия культуральных сред: Полностью прослеживаемая единица среды, относящаяся к определенному количеству концентрата, полуфабриката или конечного продукта, которая изготовлена в соответствии с требованиями производства (контроль в процессе приготовления) и проверена на соответствие установленным требованиям качества, была произведена в течение определенного периода производства и которой присвоен один номер партии.
3.2.5. эффективность культуральных сред: Реакция питательной среды при посеве на нее контрольных организмов при определенных условиях.
3.3 Термины, используемые для характеристики питательных сред
3.3.1 культуральная среда: Перечень ингредиентов, в жидкой, полужидкой или в твердой формах, которые содержат натуральные и/или синтетические компоненты для того, чтобы поддерживать размножение или сохранять жизнеспособность микроорганизмов.
3.3.2 Классификация культуральных сред в соответствии с составом
3.3.2.1 культуральная среда с химически определенным составом: Питательная среда, состоящая только из химически определенных ингредиентов (то есть, с известной молекулярной структурой и степенью чистоты).
3.3.2.2 культуральная среда с не полностью охарактеризованным химическим составом: Культуральная среда, состоящая полностью или частично из природных материалов, обработанных или неизмененных, химический состав которых определен не полностью.
3.3.3 Культуральные среды, классифицируемые по консистенции
3.3.3.1 жидкая культуральная среда: Культуральная среда, состоящая из водного раствора одного или более компонентов (например, пептонная вода, питательный бульон).
1 В некоторых случаях к жидкой культуральной среде добавлены твердые частицы.
2 Жидкие культуральные среды в пробирках, флаконах или колбах обычно называют «бульон» [ЕН 1659]
3.3.3.2 плотная культуральная среда и полужидкая культуральная среда: Плотная культуральная среда, содержащая затвердевающие материалы (например, агар-агар, желатин и т.д.), в различных концентрациях.
1 Из-за международного использования культуральные среды с затвердителем агар-агаром часто обозначают сокращенно термином «агар» для твердых культуральных сред, например «агар для подсчета колоний на чашках Петри».
2 Твердые культуральные среды, разлитые в чашки Петри, обычно называют «чашка». Твердые культуральные среды, разлитые в пробирки, которые размещают в наклонном положении при затвердевании среды часто называют «косяками» или «скошенным агаром».
3.3.4 Классификация культуральных сред по назначению
3.3.4.1 транспортная среда: Культуральная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов с момента отбора образца до начала ее анализа в лаборатории.
3.3.4.2 среда для сохранения микроорганизмов: Культуральная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов в течение продолжительного периода, чтобы защищать их против неблагоприятных влияний, которые могут происходить в течение долгосрочного хранения и позволять восстанавливать рост микроорганизма после этого периода (например, яичная среда Дорсе (Dorse).
3.3.4.3 среда восстановления: Культуральная среда, позволяющая находящимся в состоянии стресса и ослабленным микроорганизмам восстанавливать способность для нормального роста без обязательного условия их размножения.
3.3.4.4 среда обогащения: Преимущественно жидкая культуральная среда, которая благодаря ее составу обеспечивает особенно благоприятные условия для размножения микроорганизмов.
3.3.4.4.1 селективная среда обогащения: Среда обогащения, которая поддерживает размножение определенных микроорганизмов, частично или полностью подавляя рост других микроорганизмов (например, среда Раппапорта-Василиадиса (Rappaport-Vassiliadis).
3.3.4.4.2 неселективная среда обогащения: Среда обогащения, которая поддерживает рост большинства микроорганизмов (например, питательный «бульон»).
3.3.4.5 среда для выделения отдельных (изолированных) колоний: Плотная или полужидкая культуральная среда, которая поддерживает рост микроорганизмов.
3.3.4.5.1 селективная среда для выделения отдельных (изолированных) колоний: Селективная среда, которая поддерживает рост определенных микроорганизмов, при отсутствии роста других микроорганизмов (например, агар PALCAM, агар MacConkey (МакКонки).
3.3.4.5.2 неселективная среда для выделения отдельных колоний: Среда выделения, которая не предназначена для избирательного подавления роста микроорганизмов (например, питательный агар).
3.3.4.6 дифференциальная (культуральная) среда: Культуральная среда, с помощью которой определяют одну или более физиологических/биохимических характеристик микроорганизмов для их идентификации (например, среда с мочевиной, агар Клиглера (Kligler)).
В чем заключается порядок приготовления культуральных сред
ГОСТ ISO 11133-1-2011
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред
Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории
Microbiology of food and animal feeding stuffs. Guidelines on preparation and production of culture media. Part 1. General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory
Дата введения 2013-01-01
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным учреждением «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф.Гамалеи» Российской академии медицинских наук на основе русской версии стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 40-2011 от 29 ноября 2011 г.)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. N 1475-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 11133-1-2011 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2013 г.
Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.
Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе «Национальные стандарты».
Эти три критерия являются важной частью внутреннего контроля качества и при наличии соответствующей документации позволяют осуществлять эффективный контроль культуральных сред, чтобы обеспечивать получение точных и объективных результатов.
1 Область применения
В настоящем стандарте представлена общая терминология, связанная с обеспечением качества приготовления культуральных сред, и установлены минимальные требования, которые следует использовать для микробиологического анализа продуктов, предназначенных для потребления в пищу и корма для животных.
Эти требования применимы к трем категориям культуральных сред, используемых в лабораториях, которые готовят и/или используют культуральные среды для выполнения микробиологических исследований:
— коммерческим средам, готовым к использованию;
— средам, приготовленным из индивидуальных ингредиентов.
2 Нормативные ссылки
Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные документы*. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного документа.
* Стандарт пересматривается и будет объединен с ISO 9000-1:1994 с целью создания ISO 9000:2000 «Системы менеджмента качества. Основные положения и словарь». ISO 9000:2000 заменен на ISO 9000:2005.
3 Терминология
3.1 Общие положения
В этом разделе приводятся общие определения, связанные с обеспечением качества, и различные термины, касающиеся питательных сред и выращивания культур. Стандарты, приведенные в скобках, указывают на то, что данный текст идентичен тексту из этих стандартов.
3.2 Термины по обеспечению качества
3.2.1 обеспечение качества: Все виды плановой и систематической деятельности, осуществленные в пределах системы качества и считающиеся необходимыми для обеспечения адекватных условий, которые обеспечивают требования по качеству.
3.2.2 контроль качества: Операционные методы и деятельность персонала для выполнения требований по качеству.
3.2.3 внутренний контроль качества: Непрерывная программа контроля работы лаборатории, подготовленная самой лабораторией или для нее, основанная на анализе контроля качества с корректировкой исполнения, если это необходимо.
3.2.4 партия культуральных сред: Полностью прослеживаемая единица среды, относящаяся к определенному количеству концентрата, полуфабриката или конечного продукта, которая изготовлена в соответствии с требованиями производства (контроль в процессе приготовления) и проверена на соответствие установленным требованиям качества, была произведена в течение определенного периода производства и которой присвоен один номер партии.
3.2.5 эффективность культуральных сред: Реакция питательной среды при посеве на нее контрольных организмов при определенных условиях.
3.3 Термины, используемые для характеристики питательных сред
3.3.1 культуральная среда: Перечень ингредиентов, в жидкой, полужидкой или в твердой формах, которые содержат натуральные и/или синтетические компоненты, для того чтобы поддерживать размножение или сохранять жизнеспособность микроорганизмов.
3.3.2 Классификация культуральных сред в соответствии с составом
3.3.2.1 культуральная среда с химически определенным составом: Питательная среда, состоящая только из химически определенных ингредиентов (то есть с известной молекулярной структурой и степенью чистоты).
3.3.2.2 культуральная среда с не полностью охарактеризованным химическим составом: Культуральная среда, состоящая полностью или частично из природных материалов, обработанных или неизмененных, химический состав которых определен не полностью.
3.3.3 Культуральные среды, классифицируемые по консистенции
3.3.3.1 жидкая культуральная среда: Культуральная среда, состоящая из водного раствора одного или более компонентов (например, пептонная вода, питательный бульон).
1 В некоторых случаях к жидкой культуральной среде добавлены твердые частицы.
2 Жидкие культуральные среды в пробирках, флаконах или колбах обычно называют «бульон».
3.3.3.2 плотная культуральная среда и полужидкая культуральная среда: Плотная культуральная среда, содержащая затвердевающие материалы (например, aгар-aгар, желатин и т.д.), в различных концентрациях.
1 Из-за международного использования культуральные среды с затвердителем агар-агаром часто обозначают сокращенно термином «агар» для твердых культуральных сред, например «агар для подсчета колоний на чашках Петри».
2 Твердые культуральные среды, разлитые в чашки Петри, обычно называют «чашка». Твердые культуральные среды, разлитые в пробирки, которые размещают в наклонном положении при затвердевании среды, часто называют «косяками» или «скошенным агаром».
3.3.4 Классификация культуральных сред по назначению
3.3.4.1 транспортная среда: Культуральная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов с момента отбора образца до начала ее анализа в лаборатории.
3.3.4.2 среда для сохранения микроорганизмов: Культуральная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов в течение продолжительного периода, чтобы защищать их против неблагоприятных влияний, которые могут происходить в течение долгосрочного хранения, и позволять восстанавливать рост микроорганизма после этого периода (например, яичная среда Дорсе (Dorse)).
3.3.4.3 среда восстановления: Культуральная среда, позволяющая находящимся в состоянии стресса и ослабленным микроорганизмам восстанавливать способность для нормального роста без обязательного условия их размножения.
ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории»
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО
ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ
НАЦИОНАЛЬНЫЙ
СТАНДАРТ
РОССИЙСКОЙ
ФЕДЕРАЦИИ
ГОСТ Р ИСО
11133-1-
2008
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред
Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории
Предисловие
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным учреждением «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Российской академии медицинских наук на основе русской версии стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 декабря 2008 г. № 478-ст
Введение
Эти три критерия являются важной частью внутреннего контроля качества и при наличии соответствующей документации позволяют осуществлять эффективный контроль культуральных сред, чтобы обеспечивать получение точных и объективных результатов.
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред
Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории
Microbiology of food and animal feeding stuffs. Guidelines on preparation and production of culture media. Part 1. General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory
1 Область применения
В настоящем стандарте предоставлена общая терминология, связанная с обеспечением качества приготовления культуральных сред, и установлены минимальные требования, которые следует использовать для микробиологического анализа продуктов, предназначенных для потребления в пищу и корма для животных.
Эти требования применимы к трем категориям культуральных сред, используемых в лабораториях, которые готовят и/или используют культуральные среды для выполнения микробиологических исследований:
— коммерческим средам, готовым к использованию;
— средам, приготовленным от индивидуальных ингредиентов.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ИСО 8402:1994 Управление качеством и обеспечение качества. Словарь. 1)
1) Стандарт в настоящее время пересматривается и будет объединен с ИСО 9000-1:1994 с целью создания ИСО 9000:2000 «Системы менеджмента качества. Основные положения и словарь».
3 Терминология
3.1 Общие положения
В этом разделе приводятся общие определения, связанные с обеспечением качества, и различные термины, касающиеся питательных сред и выращивания культур. Стандарты, приведенные в скобках, указывают на то, что данный текст идентичен тексту из этих стандартов.
3.2 Термины по обеспечению качества
3.2.1 обеспечение качества: Все виды плановой и систематической деятельности, осуществленные в пределах системы качества и считающиеся необходимыми для обеспечения адекватных условий, которые обеспечивают требования по качеству
3.2.2 контроль качества: Операционные методы и деятельность персонала для выполнения требований по качеству
3.2.3 внутренний контроль качества: Непрерывная программа контроля работы лаборатории, подготовленная самой лабораторией или для нее основанная на анализе контроля качества с корректировкой исполнения, если это необходимо.
3.2.4 партия культуральных сред: Полностью прослеживаемая единица среды, относящаяся к определенному количеству концентрата, полуфабриката или конечного продукта, которая изготовлена в соответствии с требованиями производства (контроль в процессе приготовления) и проверена на соответствие установленным требованиям качества, была произведена в течение определенного периода производства и которой присвоен один номер партии.
3.2.5 эффективность культуральных сред: Реакция питательной среды при посеве на нее контрольных организмов при определенных условиях.
3.3 Термины, используемые для характеристики питательных сред
3.3.1 культуральная среда: Перечень ингредиентов, в жидкой, полужидкой или в твердой формах, которые содержат натуральные и/или синтетические компоненты для того, чтобы поддерживать размножение или сохранять жизнеспособность микроорганизмов.
3.3.2 Классификация культуральных сред в соответствии с составом
3.3.2.1 культуральная среда с химически определенным составом: Питательная среда, состоящая только из химически определенных ингредиентов (то есть, с известной молекулярной структурой и степенью чистоты).
3.3.2.2 культуральная среда с не полностью охарактеризованным химическим составом:
Культуральная среда, состоящая полностью или частично из природных материалов, обработанных или неизмененных, химический состав которых определен не полностью.
3.3.3 Культуральные среды, классифицируемые по консистенции
3.3.3.1 жидкая культуральная среда: Культуральная среда, состоящая из водного раствора одного или более компонентов (например, пептонная вода, питательный бульон).
1 В некоторых случаях к жидкой культуральной среде добавлены твердые частицы.
2 Жидкие культуральные среды в пробирках, флаконах или колбах обычно называют «бульон» [ЕН 1659]
3.3.3.2 плотная культуральная среда и полужидкая культуральная среда: Плотная культуральная среда, содержащая затвердевающие материалы (например, агар-агар, желатин и т.д.,), в различных концентрациях.
1 Из-за международного использования культуральные среды с затвердителем агар-агаром часто обозначают сокращенно термином «агар» для твердых культуральных сред, например «агар для подсчета колоний на чашках Петри».
2 Твердые культуральные среды, разлитые в чашки Петри, обычно называют «чашка». Твердые культуральные среды, разлитые в пробирки, которые размещают в наклонном положении при затвердевании среды часто называют «косяками» или «скошенным агаром».
3.3.4 Классификация культуральных сред по назначению
3.3.4.1 транспортная среда: Культуральная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов с момента отбора образца до начала ее анализа в лаборатории.
3.3.4.2 среда для сохранения микроорганизмов: Культуральная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов в течение продолжительного периода, чтобы защищать их против неблагоприятных влияний, которые могут происходить в течение долгосрочного хранения и позволять восстанавливать рост микроорганизма после этого периода (например, яичная среда Дорсе ( Dorse ).
3.3.4.3 среда восстановления: Культуральная среда, позволяющая находящимся в состоянии стресса и ослабленным микроорганизмам восстанавливать способность для нормального роста без обязательного условия их размножения.
3.3.4.4 среда обогащения: Преимущественно жидкая культуральная среда, которая благодаря ее составу обеспечивает особенно благоприятные условия для размножения микроорганизмов.
3.3.4.4.2 неселективная среда обогащения: Среда обогащения, которая поддерживает рост большинства микроорганизмов (например, питательный «бульон»).
3.3.4.5 среда для выделения отдельных (изолированных) колоний: Плотная или полужидкая культуральная среда, которая поддерживает рост микроорганизмов.
3.3.4.5.2 неселективная среда для выделения отдельных колоний: Среда выделения, которая не предназначена для избирательного подавления роста микроорганизмов (например, питательный агар).
3.3.4.6 дифференциальная (культуральная) среда: Культуральная среда, с помощью которой определяют одну или более физиологических/биохимических характеристик микроорганизмов для их идентификации (например, среда с мочевиной, агар Клиглера ( Kligler ).
3.3.4.7 среда для идентификации: Культуральная среда, предназначенная для выявления определенной реакции идентификации, которая далее не требует дальнейшего подтверждения исследования.
3.3.4.8 культуральные среды, имеющие многоцелевое использование: Определенные культуральные среды могут принадлежать к нескольким категориям, например кровяной агар является средой восстановления согласно 3.3.4.3, средой выделения согласно 3.3.4.5 и дифференциальной средой согласно 3.3.4.6, используемой для обнаружения гемолиза.
3.3.5 Культуральные среды, классифицируемые в соответствии с методом приготовления
3.3.5.1 среда, готовая к использованию: Культуральная среда, находящаяся в контейнерах в готовой к использованию форме (например, чашки Петри или пробирки, или другие контейнеры)
3.3.5.2 культуральная среда, приготовленная из коммерческих сухих (обезвоженных) реагентов: Культуральная среда в сухой форме, которая не готова к немедленному использованию (например, порошки, гранулы, лиофилированные изделия). Повторная гидратация позволяет получить один из двух видов сред:
— среда, полностью готовая к использованию;
— среда, к которой добавляют неустойчивые компоненты непосредственно перед использованием.
3.4 Термины, используемые для характеристики контрольных микроорганизмов
3.4.1 контрольные микроорганизмы: Тест-микроорганизмы обычно используют для контроля качества и испытания эффективности культуральных сред.
3.4.2 контрольный (эталонный) штамм: Микроорганизм, для которого определен род и вид. Микроорганизм внесен в каталог и описан согласно его характеристикам. Предпочтительно, чтобы было установлено его происхождение.
3.4.3 контрольные (эталонные) культуры: Набор отдельных идентичных культур, полученных в лаборатории посредством получения от одного пересева из контрольного штамма либо имеющегося в лаборатории или полученного от поставщика.
3.4.4 рабочая культура: Первичная субкультура, полученная от контрольного посева контрольной культуры (см. 3.4.3).
4 Методы контроля качества питательных сред
4.1 Документация
4.1.1 Документация, предоставляемая изготовителем
Документация, предоставляемая изготовителем, включает следующее:
— наименование среды, отдельных ингредиентов и всех добавок, включая их товарные коды;
— значение рН среды перед применением;
— информацию о хранении и дату истечения срока годности;
— оценку эффективности и используемый тест-(микро)организм;
— свидетельство о контроле качества;
— данные по опасности/защите (при необходимости).
4.1.2 Контрольная карта лаборатории
Контрольная карта лаборатории после получения среды включает следующую информацию:
— наименование среды и код партии;
— дату истечения срока годности;
— состояние и целостность упаковки
4.2 Хранение
4.2.1 Общие положения
Во всех случаях следуют инструкциям изготовителя, где имеются данные об условиях хранения, сроке истечения и времени использования.
4.2.2 Управление качеством и контроль качества сухих (обезвоженных) сред и добавок
Среды поставляют в обезвоженных (сухих) в виде порошка или гранул, в герметично упакованных контейнерах, а добавки различных селективных или диагностических реагентов в лиофилизированной или жидкой формах.
Для поддержания эффективного учета необходимые проверки должны включать в себя:
— проверку даты первого вскрытия сред и добавок;
— визуальную оценку содержимого открытых контейнеров.
После открытия нового контейнера на качество среды может повлиять окружающая среда, в которой хранят открытые контейнеры со средами и добавками. Потеря качества сухих (обезвоженных) сред проявляется в изменении текучести порошка, гомогенности, образовании комков, изменении цвета и т.д. Любую сухую (обезвоженную) среду, которая стала влажной или проявляет очевидные изменения физических свойств, следует исключать из дальнейшей работы.
4.2.3 Коммерческие среды, готовые к использованию
В отношении условий хранения, времени использования сред и даты истечения срока годности необходимо соблюдать инструкцию изготовителя.
4.2.4 Среды, приготовленные из имеющихся в продаже доступных сухих (обезвоженных) ингредиентов и основных индивидуальных компонентов
Срок годности сред, приготовленных из имеющихся в продаже доступных сухих (обезвоженных) ингредиентов и основных индивидуальных компонентов, различен. Пользователь вправе установить общие сроки хранения приготовленных сред. Специальные международные или национальные стандарты могут предписывать конкретные условия и срок годности.
Стерилизованные среды, разлитые в чашки, пробирки или флаконы и реагенты, которые не используются немедленно, должны быть защищены от света и высыхания.
Если дата истечения срока годности не была установлена или не указана в международном стандарте, среды, к которым конечные компоненты добавляют непосредственно перед использованием, следует хранить в холодильнике не более 3 мес или при комнатной температуре не более одного месяца в условиях, не допускающих изменения их состава. Однако рекомендуется, чтобы среды, к которым добавляют селективные добавки, использовать в день их приготовления. Плотные среды, содержащие химически активные и/или неустойчивые вещества, следует хранить в таре, в которой осуществляют их плавление.
Следует наблюдать за любым изменением цвета, признаками появления пыли, обезвоживания или микробного роста. Партии сред, показывающие такие изменения, не следует использовать.
До использования или перед нагреванием рекомендуется доводить среды до температуры окружающей среды.
4.3 Приготовление питательных сред в лаборатории
4.3.1 Общие положения
Необходимо следовать хорошей лабораторной практике и инструкциям изготовителя, касающимся работы с сухими (обезвоженными) средами и другими компонентами, входящими в их состав, особенно содержащими опасные материалы, такие как соли желчных кислот или другие селективные компоненты.
Когда среды приготовляют из сухих (обезвоженных) коммерческих составов, необходимо точно выполнять инструкции изготовителя. Документ (см. 4.1.1) дополнительно должен содержать информацию о порядке приготовления сред.
Для сред, приготовляемых из отдельных компонентов, необходимо строго соблюдать все операции, предусмотренные в инструкции изготовителя. Кроме того, до начала приготовления сред следует проверить полную идентичность (то есть код и номер партии) всех используемых компонентов.
Используемая вода должна быть дистиллированной или равноценной по качеству, то есть освобожденной от веществ, которые могут ингибировать или влиять на рост микроорганизмов при контрольных исследованиях. Если дистиллированную воду приготавливают из хлорированной воды, хлор необходимо нейтрализовать перед дистилляцией.
Дистиллированную воду следует хранить в контейнерах, изготовленных преимущественно из инертных материалов (например, нейтральное стекло, полиэтилен и т.д.), которые должны быть свободными от ингибирующих рост микроорганизмов, веществ до их начального использования.
Дистиллированная вода хорошего качества должна иметь удельное сопротивление, по меньшей мере, 300000 Ом × см.
Предупреждение! Вода, пропущенная через ионообменные устройства (деионизированная), может быть обсеменена высоким количеством микроорганизмов; желательно такую воду не использовать без подтверждения низкого содержания в ней микроорганизмов. За консультацией о выборе лучшего метода минимизации заражения микроорганизмами можно обратиться к изготовителю. Значительно загрязненная микроорганизмами деионизированная вода, которая была стерилизована фильтрованием, может содержать достаточно веществ, подавляющих рост некоторых микроорганизмов.
4.3.3 Взвешивание и перегидратация (растворение)
Тщательно взвешивают соответствующее количество сухой (обезвоженной) среды при соблюдении мер предосторожности, чтобы не вдохнуть порошок, особенно для среды, содержащей ядовитые вещества. Для растворения постепенно добавляют требуемое количество воды, избегая образования комков.
4.3.4 Растворение и дисперсия
Сухие (обезвоженные) среды нуждаются в быстрой дисперсии путем постоянного перемешивания с нагреванием, если необходимо, для растворения. Средам, содержащим агар, нужно дать несколько минут для впитывания воды с перемешиванием до нагревания. Для сред, приготовляемых из отдельных компонентов, каждый компонент необходимо добавлять отдельно и полностью растворять, прежде чем окончательно довести до конечного объема.
4.3.5 Измерение и получение нужной рН
рН измеряют, используя рН-метр, и получают необходимую рН, если среду приготовляют из отдельных компонентов в лаборатории таким образом, чтобы после стерилизации и охлаждения до температуры 25 °С среда имела требуемое значение рН + 0,2 единицы рН, если нет других указаний. Нужное значение рН получают с помощью гидроокиси натрия ( NaOH ) концентрацией приблизительно 40 г/л (приблизительно 1 мол/л) или соляной кислотой ( HCl ) приблизительно 36,5 г/л (приблизительно 1 мол/л).
Среду разливают в соответствующие контейнеры, имеющие объем в 1,2-3 раза, превосходящий объем среды.
4.3.7.1 Общие положения
Стерилизацию культуральных сред и реактивов можно выполнять, используя стерилизацию горячим паром (см. 4.3.7.2) или фильтрацией (см. 4.3.7.3).
4.3.7.2 Стерилизация горячим паром
Контроль эффективности стерилизации является существенным в приготовлении культуральных сред.
4.3.7.3 Стерилизация фильтрацией
Стерилизация фильтрацией может быть выполнена в вакуумных или герметичных условиях. Используют мембраны и фильтровальные элементы с диаметром пор 0,22 мкм. Они должны быть стерилизованы в автоклаве. При приобретении элементов фильтра и мембран в стерильном состоянии при их использовании следуют инструкциям изготовителя. Стерилизуют различные части аппарата фильтрации в собранном или разобранном состоянии в автоклаве в течение 15 мин при температуре 121 °С. Если необходимо, после автоклавирования сборку в стерильных условиях осуществляют в ламинарном шкафу с очищенным потоком воздуха.
4.3.7.4 Мониторинг (слежение)
После автоклавирования, кипячения или фильтрации во всех средах проверяют значение рН, цвет, стерильность и консистенцию.
4.3.8 Приготовление добавок
Коммерческие добавки, содержащие токсические агенты, особенно антибиотики, следует приготовлять с осторожностью, избегая распыления порошка, который может вызывать аллергические или другие реакции у персонала лаборатории. При приготовлении добавок необходимо соблюдать технику безопасности и следовать инструкциям изготовителя. Не допускается использовать добавки с просроченным сроком годности. Например, для рабочих растворов антибиотика срок годности истекает в тот же самый день. При определенных обстоятельствах растворы антибиотика допускается хранить в замороженном состоянии в соответствующих объемах (аликвотах). Не допускается их повторное замораживание после оттаивания. Потенциальная потеря активности вследствие замораживания должна быть обсуждена с изготовителем или определена пользователем.
4.4 Подготовка к использованию
4.4.1 Плавление агаровых культуральных сред
Плавление культуральной среды осуществляют, поместив ее в кипящую водяную баню или любым другим способом, дающим идентичные результаты (например, в автоклаве с проходящим потоком пара). Среды, которые ранее были автоклавированы, повторно нагревают в течение минимального времени, чтобы сохранять качество среды. Следует избегать перегрева и удалять среду из водяной бани, когда она расплавилась. Охлаждают расплавленную среду до температуры (47 ± 2) ° С в водяной бане с контролем температуры в течение времени до ее использования. Время, необходимое для достижения температуры 47 °С, зависит от вида среды, объема и количества флаконов в водяной бане. Расплавленную среду следует использовать, как можно скорее, по возможности, сразу, но не более чем через 4 ч.
4.4.2 Деаэрация культуральных сред
Если необходимо, до использования нагревают культуральную среду в кипящей воде или в потоке пара в течение 15 мин, приоткрыв крышку или пробку; после нагревания крышки или пробки плотно закрывают и быстро охлаждают до необходимой температуры.
4.4.3 Введение дополнительных добавок
Термолабильные (неустойчивые к нагреванию) добавки следует добавлять в среду после ее охлаждения до (47 ± 2) °С. Стерильная добавка перед добавлением к агаровой среде должна быть доведена до комнатной температуры. Холодные жидкости могут привести к образованию геля из агара или сформировать прозрачные хлопья. Все добавки добавляют в среду осторожно и перемешивают до полного растворения, затем наливают в конечные контейнеры, по возможности, максимально быстро насколько это возможно.
4.4.4 Приготовление и хранение сред в чашках Петри
Разливают агаровую среду в чашки Петри, чтобы получить слой толщиной не менее 2 мм (например, для чашек диаметром 90 мм обычно требуется 15 см 3 среды). Чтобы дать агаровой среде охладиться и застыть, чашки Петри, закрытые крышками, помещают на прохладную, горизонтальную поверхность.
Срок годности чашек с разлитой агаровой средой можно увеличить, если хранить их в герметично закрытых полиэтиленовых пакетах. Чтобы избежать появления конденсата, чашки необходимо охладить перед помещением в пакеты. Не допускается подсушивание поверхности агаровых чашек перед хранением в охлажденном состоянии.
До инокуляции твердой питательной среды на поверхность плотной питательной среды чашки подсушивают, предпочтительно с удаленными крышками и с поверхностью агара, повернутой вниз, в сушильном шкафе при температуре от 25 °С до 50 °С или в ламинарном боксе, пока с поверхности агаровой среды не исчезнут капли влаги. Нельзя пересушивать чашки. Чашки с готовой к использованию агаризованной средой, приобретенной в продаже, должны храниться и использоваться согласно инструкции изготовителя.
4.4.5 Инкубация в термостате
Чашки рекомендуется ставить в стопки не более чем по 6 шт. в высоту. Следует оставлять пространство для циркуляции воздушного потока, чтобы среда быстро пришла в равновесие с температурой инкубации в термостате настолько, насколько это возможно. Для жидких сред время для достижения температуры инкубации зависит от ряда факторов, например объема, размещения, типов контейнеров, типов термостата. В случае выращивания в анаэробных условиях может оказаться необходимым сложить чашки в стопки не менее шести чашек в стопке.
4.5 Избавление от сред
Контаминированные и неиспользованные культуральные среды следует удалять безопасным способом в соответствии с национальными правилами.
5 Контроль качества конечного продукта
5.1 Контроль качества физических характеристик
Лабораторное тестирование должно включать в себя, как минимум:
— показатель РН, измеренный при температуре 20 °С и 25 °С;
— количество заполнения и/или толщину слоя;