Vgs d4 0 образец d3 что это
Статьи
Антителогенез у больных HCV-инфекцией
В.И. Лучшев, Т.Я. Чернобровкина, С.Н. Жаров
Кафедра инфекционных болезней, тропической медицины и эпидемиологии, ГОУ ВПО «РГМУ МЗ РФ» (зав. кафедрой – проф. В.И. Лучшев)
Из литературных источников известно, что геном вируса гепатита С (ВГС) кодирует три структурных белка: протеин С (core, ядерный), Е1 и Е2 (протеины оболочки) и четыре неструктурных белка: NS2, NS3, NS4 (A,B), NS5 (A,B). К каждому из белков в организме человека вырабатываются антитела, циркулирующие в крови. В настоящее время предлагается широкий спектр современных иммунологических и молекулярно-биологических диагностических тест-систем, а также гистологических исследований печени для выявления антительных, антигенных маркеров и RNA вируса гепатита С, различающихся своей чувствительностью и специфичностью [1, 2, 5, 8, 10]. Наиболее ранним маркером инфекции является обнаружение в сыворотке крови RNA-HCV через 1-3 недели от момента инфицирования. Однако, положительная RNA-HCV в сыворотке крови регистрируется только у 25% инфицированных ВГС на фоне нормальных уровней активности трансаминаз, поэтому чаще заболевание длительное время не диагностируется [2].
Обычно антитела к структурным белкам выявляются в сыворотке крови через 6-8 недель от инфицирования, причем они не обладают вируснейтрализующими свойствами, достаточными для элиминации вируса. Именно белки внешней оболочки (Е1 и Е2) ВГС имеют участки с высокой частотой аминокислотных замен, в результате которых образуются большое число генотипов и субтипов. Антитела к неструктурным белкам определяются в сыворотке крови несколько позже (через 10 недель от начала болезни) [3, 4, 5, 6]. В литературе появляется все больше данных о предполагаемых функциях и прогностическом значение как антигенов так и антител к ВГС. Считают, что нуклеокапсидный белок активирует апоптоз инфицированных клеток, способствует увеличению числа рецепторов апоптоза на клеточной мембране гепатоцита и повышению чувствительности клетки к проапоптотическим стимулам. Так, за чувствительность к интерферону возможно отвечает NS5 (A,B) белок. Высокий титр антител к поверхностным (структурным) белкам в острой фазе заболевания характеризует благоприятное течение HCV-инфекции [3]. Отсутствие антител к NS5 белку у больных ОГС характерно для периода реконвалесценции [5]. Выявление анти-NS4 ассоциируется с поздними морфологическими стадиями болезни – циррозом печени [4, 7, 9]. Диагностическая интерпретация антител к NS3 неструктурному белку по данным литературы неоднозначна. Кроме того, данные о маркерах вируса С изучались в образцах сыворотки крови больных в основном при моно инфекции HCV. Однако, доказанная репликация ВГС не только в клетках печени, но и в клетках эпителия, кератиноцитах, лимфоидных клетках и даже клетках крови послужила основанием для исследования маркеров ВГС на эритроцитах крови больных [7, 11].
Поэтому целью нашей работы являлось усовершенствование дифференциальной диагностики НСV-инфекции на основании исследования антител к структурным и неструктурным белкам ВГС не только в сыворотке, но и на эритроцитах крови больных.
Материалы и методы
Изучение клинической картины, лабораторных показателей и антителогенеза проводилось у 57 больных, страдающих HCV-инфекцией и микст-инфекцией HCV + HBV. Первую группу пациентов получавших базисную терапию, составили 17 больных с острым гепатитом С (ОГС), вторую 15 с обострением хронического гепатита С (ХГС), третью 25 пациентов с микст-инфекцией HCV+HBV по типу супер-инфекции острый гепатит В на фоне хронического гепатита С (ОГВ+ХГС). Пациенты находились на стационарном лечении в Инфекционной клинической больнице №3 г. Москвы (главный врач – Лазуткина Л.И.).
Верификацию вирусных гепатитов проводили с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Определение спектра антител класса IgM и IgG к вирусу гепатита С в сыворотке и на эритроцитах крови проводилось методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем «ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР» и «ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР- GM» НПО «Диагностические системы» (г. Нижний Новгород). Исследование крови пациентов проводилось в день госпитализации, через 1 месяц. ИФА проводился строго по инструкции прилагаемой к каждой тест-системе с поэтапным добавлением в лунки планшета готовых реагентов. В основе метода лежит реакция рекомбинантных антигенов, сорбированных раздельно на стрипах полистиролового планшета с антителами в исследуемых сыворотках и на эритроцитах крови больных HCV-инфекцией. Венозную кровь брали из локтевой вены натощак и центрифугировали 5 минут с 1500 оборотов в минуту. Сыворотку крови отделяли, помещали в пластиковые контейнеры и хранили в морозильной камере. Верификацию вирусных гепатитов проводили с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Оставшийся осадок так же помещали в морозильную камеру. Перед постановкой реакции, сыворотки крови пациентов размораживались, а осадок крови трижды центрифугировали с физиологическим раствором (0,9% NaCl) в течение 5 минут с частотой 1500 оборотов в минуту с целью приготовления отмытых разрушенных эритроцитов.
Учет результатов проводили спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Рассчитывалась критическая оптическая плотность (ОП) каждого антигена по формуле:
ОП крит. core-Ag = среднее значение ОП К- (core) + 0,2
Реакция считалась положительной при превышении результата над показателем критической ОП не менее чем на 20%.
ИФА проводился в лаборатории кафедры инфекционных болезней, тропической медицины и эпидемиологии РГМУ на базе клинической инфекционной больницы №3.
Результаты и обсуждение
При исследовании спектра маркеров HCV-инфекции в сыворотке и на эритроцитах крови, в условиях динамического наблюдения за больными получены следующие результаты.
У всех больных с моно-HCV-инфекцией при госпитализации в стационар обнаруживаются антитела к ядерному белку ВГС (100%) и в несколько меньшем проценте (84%) у пациентов с микст-инфекцией ОГВ+ХГС. В динамике заболевания сохраняется 100% выявляемость этих антител во всех группах (табл. 1).
Таким образом, наличие антител к core-белку в сыворотке крови практически у всех больных при поступлении в стационар и после базисной терапии может свидетельствовать о наличии у пациента только HCV-инфекции, не указывая на длительность течения и период заболевания. Следовательно, характерный спектр антител к структурному core-белку в сыворотке крови больных будет недостаточным для дифференциальной диагностики HCV-инфекции.
Параллельное определение спектра антител на эритроцитах крови показало, что в них сохраняется наибольшая выявляемость антител к core-белку у всех больных в период разгара и в период реконвалесценции у пациентов с ХГС и микст-инфекцией, в противоположность ОГС (20%, р Задать вопрос Оставить отзыв
Ведение пациентов с ко-инфекцией ВИЧ и вирусных гепатитов
Общая информация
Краткое описание
Руководство по хроническому гепатиту В, профилактика, помощь и лечение, Март, 2015. Женева: ВОЗ; 2015
Диагностика
Большинство пациентов с хроническим вирусным гепатитом (ХВГС) не предьявляют жалоб, не имеют клинических признаков болезни и выявляются при обследовании по поводу хронического заболевания печени или скринингового исследования.
Хронический вирусный гепатит С у ЛЖВ, не активная форма
Клинические критерии:
Хронический вирусный гепатит С у ЛЖВ, активная форма
Клинические критерии:
Показания к тестированию ЛЖВ на вирусный гепатит С
В программу скринига на ВГC входит тест на антитела к вирусу гепатита C (anti-HCV), методом иммуноферментного анализа (ИФА). Если результат этого теста положителен, то определяют наличие РНК ВГC и генотип ВГС, методом полимеразноцепной реакции (ПЦР).
Стандартные определения случая ко-инфекции ВИЧ и ВГВ 11
Хронический вирусный гепатит В у ЛЖВ, неактивная форма
У большинства пациентов с хронической BГВ-инфекцией симптомы болезни не наблюдаются долгие годы.
Лечение
Новейшие схемы лечения ХВГС с помощью пероральных препаратов прямого противовирусного действия (ПППД) обеспечивают схожие показатели стойкого вирусологического ответа независимо от ВИЧ-статуса (таблица 1).
Таблица 1. Схемы противовирусной терапии ХВГС у ЛЖВ
(лица без цирроза, ранее не получавших ПППД и/или не ответившие на PegIFN и рибавирин)
Генотип 1
Даклатасвир 60 мг+Софосбувир 400 мг в течение 12 недель ИЛИ
Ледипасвир 90 мг+ Софосбувир 400 мг, в течение 12 недель
Генотип 2
Даклатасвир 60 мг+Софосбувир 400 мг в течение 12 недель ИЛИ
Софосбувир 400 мг+Рибавирин*, в течение 12 недель
Генотип 3
Даклатасвир 60 мг+Софосбувир 400 мг в течение 12 недель ИЛИ
Софосбувир 400 мг+Рибавирин*, в течение 24 недель
Генотип 4или 5 или 6
Даклатасвир 60 мг+Софосбувир 400 мг в течение 12 недель ИЛИ
Ледипасвир 90 мг+ Софосбувир 400 мг, в течение 12 недель
* Рибавирин – ежесуточно в дозе, зависящей от массы тела: 7
Таблица 4. Противопоказания/предостережения при лечении ПППД
— Рибавирин (перорально) 7,5 мг/кг массы тела два раза в день.
Рекомендуется следующая фиксированная доза рибавирина по весу:
Примечание: Нормальные значения площади поверхности тела9:
Новорождённый 0.25м²; Ребёнок 2 года 0.5м²; Ребёнок 9 лет 1.07м²; Ребёнок 10 лет1.14м²; Ребёнок 12-13 лет 1.33м²; Для мужчин 1.9м²; Для женщин 1.6м²
Тактика ведения пациентов с ко-инфекцией ВИЧ и ВГС и ВГВ
Ко-инфекция ВГВ и ВГС у ЛЖВ может привести к ускоренному течению заболевания печени, при этом ВГС считается основным фактором прогрессирования фиброза. Лечение ВГС проводится в течение 12 недель при отсутствии цирроза печени и 24 недель у пациентов с циррозом печени одновременно с АРТ. Лечение ВГВ проводится согласно «Тактике ведения пациентов с ко-инфекцией ВИЧ и ВГВ» настоящего клинического протокола.
Тактика ведения пациентов с ко-инфекцией ВИЧ и ВГС и ТБ
При данном сочетании стартовая терапия направлена на ТБ. При выборе противотуберкулёзной терапии, необходимо следовать рекомендациям «Туберкулез и ВИЧ- инфекция: тактика ведения пациентов с ко-инфекцией», Приложения 6 настоящего сборника. Лечение ВГС проводится после завершения противотуберкулезной терапии.
Мониторинг эффективности лечения ВГС
Для мониторинга уровней РНК ВГС вовремя и после лечения следует использовать ПЦР с нижним порогом чувствительности а
недель
ламивудину 1,0 мг/сут)
дизопроксилфумарат
алафенамид
Прекращение лечения гепатита В (особенно при приеме ламивудина) не рекомендуется, т. к. это может привести к реактивации ВГВ, всплескам уровня АЛТ и, в редких случаях, к печеночной недостаточности.
При необходимости замены АРВ-препарата из-за развития устойчивости ВИЧ или токсичности следует продолжать лечение тенофовиром с ламивудином или тенофовиром с эмтрицитабином вместе с другими АРВ-препаратами.
У пациентов с ко-инфекцией ВГВ и ВИЧ в терминальной стадии заболевания печени требуются те же меры по лечению асцита, гепаторенального синдрома, кровотечений из варикозно расширенных вен, печеночной энцефалопатии и других проявлений печеночной декомпенсации, как у неинфицированных ВИЧ пациентов с ВГВ-инфекцией.
Ко-инфекция ВГВ с дельта агентом (ВГD) у ЛЖВ
В настоящее время недостаточно данных, которые бы позволили сформулировать четкие принципы ведения лиц с ВГD-инфекцией.
Стойкая репликация ВГD является самым важным предиктором повышения риска смертельного исхода и необходимости противовирусного лечения.
Пег-ИФН – единственный препарат, эффективный в отношении ВГD, оптимальная продолжительность лечения не менее 48 недель.
Противовирусные нуклеоз(т)идные аналоги (энтекавир, тенофовир и др.) неэффективны или недостаточно подавляют репликацию ВГD.
На поздней стадии болезни печени лечение эфавиренцем может сопровождаться повышением уровня препарата в крови, увеличивая риск токсичности для центральной нервной системы. Кроме того, лечение некоторыми АРВ-препаратами (невирапин) может сопровождаться повышением риска гепатотоксичности, и следует избегать их назначения лицам с продвинутой стадией болезни печени. (Подробная информация в КП «АРТ взрослых и подростков»)
Рекомендации по замене лечения ВГВ
Пациентов, получающих тенофовир (TDF), в случае развития существенной токсичности для почек или костного мозга — перевести на TAF или энтекавир. При назначении энтекавира вместо TDF, в схему АРТ необходимо включить другой препарат из группы НИОТ, чтобы обеспечить достаточное подавление ВИЧ.
Принципы вакцинации ЛЖВ против ВГВ
Ответ на вакцинацию против гепатита В менее выражен у ЛЖВ, особенно с низким количеством лимфоцитов CD4. В связи, с чем рекомендуется схема с четырьмя удвоенными дозами (40 мкг) вакцины: 0-1-6-12 месяцев (Приложение 11, «Иммунизация людей, живущих с ВИЧ»).
Активная иммунизация вакцинацией против ВГА
Полный курс включает две дозы: начальную дозу и вторую – через 6-12 месяцев, который должен обеспечить максимальную выработку антител.
Вирусная нагрузка. Что это за показатель и как правильно его интерпретировать.
Современные возможности ПЦР диагностики COVID-19 в лаборатории ДИЛА позволяют ответить на несколько действительно важных вопросов:
От показателя ВН (высокая, средняя, низкая) напрямую зависит заразность инфицированного человека для окружающих.
Интенсивнее всего вирус размножается за 1-3 дня до появления симптомов и в первые 5-7 дней после первых проявлений. В этот период количество вирусов в 1 мл выделений из носоглотки может составлять сотни тысяч и миллионы частиц, что соответствует среднему и высокому показателю вирусной нагрузки и делает пациента максимально заразным для окружающих. Затем количество вирусов, выделяемых человеком начинает снижаться. Обычно начиная с 7-10 дня от начала клинических проявлений человек перестает быть заразным, что соответствует снижению показателей вирусной нагрузки. В этот период вирусная РНК в анализе еще может выявляться (ПЦР позитивный с низким уровнем ВН), однако большинство исследований показывает, что после 10 дня клинических проявлений вирус теряет свою способность к репликации (размножению), а значит, и способность заражать других людей.
Как определяется ВН и что значит показатель Сt*
Как понимать полученный результат исследования
Если значение Ct низкое (5-15), это говорит о том, что вирусная нагрузка высокая и вирус SARS COV-2 передает свою генетическую информацию и размножается очень активно, образуя новые вирусные РНК в большом количестве и тем заразнее человек.
Если вирусных частичек мало, для их выявления нужно большее количество циклов. Чем выше значение порогового цикла (Ct=30-35-40), тем меньше вирусных частиц находится в образце.
Результат ПЦР отрицательный в том случае, если РНК вируса выявить не удается даже при самом высоком пороговом цикле чувствительности прибора – более 40 циклов амплификации (Сt больше 40: РНК SARS COV-2 не выявлена).
Сt 5-27.
Высокая ВН
Сt 28-34.
Средняя ВН
Человек болен COVID-19, есть риск заражения окружающих.
Рекомендуется:
Человек заражен COVID-19, есть риск заражения окружающих.
Рекомендуется:
Ct 35-40.
Низкая ВН
Человек болен COVID-19, риск заражения окружающих сохраняется, но он вероятно низок. Возможно самое начало заболевания.
Рекомендуется:
Человек заражен COVID-19. Чаще всего это может быть в период выздоровления (выведения вируса).
Рекомендуется (если был контакт с больным COVID-19):
Риск заражения окружающих отсутствует.
Возможно:
Для уточнения диагноза рекомендуется:
Риск заражения окружающих отсутствует.
Тест на імуноглобуліни класу G допоможе уточнити, чи перехворіли ви на коронавірусну інфекцію раніше.
При обнаружении любого из определяемых генов коронавируса результат теста является положительным, что означает присутствие вируса в организме.
Важно помнить, что клинические проявления заболевания могут отсутствовать при любом уровне вирусной нагрузки. При положительном результате ПЦР с высоким уровнем вирусной нагрузки и отсутствии симптомов заболевания (бессимптомном течении) вы высоко заразны для окружающих, поскольку из носоглотки выделяется много вирусов при дыхании, разговоре. Для контроля снижения заразности можно провести повторное ПЦР-тестирование с определением уровня вирусной нагрузки через 7-10 дней
Vgs d4 0 образец d3 что это
Выявление суммарных AT IgG к HCV методом ИФА недостаточно для диагностики ВГС, необходимо подтвердить их наличие методом иммуноблоттинга, чтобы исключить ложноположительный результат исследования. Пациента исследуют на наличие IgG класса AT к различным белкам HCV и IgM класса AT к HCV в динамике. Результаты серологического исследования вместе с клинико-эпидемиологическими данными позволяют установить диагноз и стадию заболевания, что играет важную роль для правильного выбора метода лечения. В основе ИФА лежит иммунная реакция взаимодействия антиген с антителом. Для обнаружения образовавшихся иммунных комплексов используют фермент, который предварительно метется узнающий компонент (антиген или антитело). Сам фермент визуализируют с использованием хромогенного медиатора, продуцирующего цвет. Превращение бесцветного хромогена в окрашенное вещество хромофор, который несет цвет, происходит под действием фермента, для которого хромоген является субстратом [2].
Цель исследования: сравнить результаты определения антител к вирусу гепатита С в сыворотке крови методом ИФА двух тест-систем.
Материалы и методы.
1) проведение иммунной реакции: получение иммунохимического комплекса в результате поэтапного или одномоментного добавления иммунных реагентов, один из которых содержит ферментную резку;
2) промывка твердой фазы, целью которой является удаление не связавшихся компонентов;
3) проведение ферментативной реакции, начинающейся после добавления раствора субстрата и хромогена с последующим внесением стоп-реагента для остановки реакции;
4) учет результатов анализа;
5) оценка результатов анализа.
Регистрация результатов иммуноферментного анализа заключается в оценке степени окрашивания основной части индикаторной полоски, измерении оптической плотности окрашенных растворов или интенсивности флуоресценции и хемилюминесценции. При исследовании, для выявления в сыворотках крови антител к ВГС (IgG и IgМ) применялись 2 тест — системы:
Для сравнительного анализа двух тест — систем было поставлено параллельно 57 тестов исследования уровня антител к ВГС методом ИФА наборами «Бест — анти ВГС» и Monolisa «Anti — НСV PLUS Version 2». Полученные результаты подверглись статистической обработке определения экстенсивных показателей с помощью программы Microsoft Excel 2010.
Результаты исследования и их обсуждения.
Тест — системы представляют собой набор реагентов, основой которых являются рекомбинантные антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (соге) и неструктурной (NS) областью генома ВГС, иммобилизированные на поверхности лунок полистироловых планшетов. Основным свойством набора является способность выявлять в сыворотках крови человека антитела к ВГС (IgG b IgМ) за счет их взаимодействия с рекомбинантными антигенами, иммобилизированными на поверхности лунок планшета. Образование комплекса антиген — антитело вызывают с помощью иммуноферментного конъюгата.
Полученные результаты обследования 7814 человек установили, что антитела к вирусу гепатиту С были обнаружены в 7 % случаев (537 человек). Из 537 человек анти — НСV АТ были обнаружены у 213 мужчин, что составило 40 % и у 324 женщин, что составляет 60%. При сопоставлении исследуемых по полу результаты исследований показали, что у обследованных женщин (6%) 1,5 раза реже, чем у мужчин (10%) обнаруживаются анти — НСV АТ (Рисунок 1).
Рисунок 1. Выявляемость положительных результатов при ВГС – скрининге в зависимости от пола
Положительная реакция на антитела подтверждалась тест-системой «Бест анти-ВГС» (набор реагентов для подтверждения наличия иммуноглобулинов классов G и М к вирусу гепатита С). Данный набор предполагает дифференцированное определение антител к структурным (соте) и неструктурным (NS 3-5) белкам вирусной частицы.
Одновременное присутствие соге и NS белков в крови наблюдалось у 76,5% мужчин и у 66 % женщин. В то же время антитела только к ядерным белкам были обнаружены у 15% женщин и у 8% мужчин. Только NS антитела выявлены у 12% женщин и 6% мужчин. Из 537 положительных исследований наличие антител к вирусу гепатита С было подтверждено у 495 пациентов. В 42 (22 женщины и 20 мужчин) случаях наблюдалась ложноположительная реакция, которая не была подтверждена в подтвердающем тесте.
В 57 образцах сыворотки крови определение антител было выполнено параллельно в двух тест-системах: «Бест — анти ВГС» и Monolisa “Anti — НСV PLUS Version 2. При проведении сравнительно скрининга двух систем были получены следующие результаты. В обоих тест-системах в 72 % случаях, в 41 из 57 образцов – реакция на антитела положительная. В подтверждающем тесте наличие антител подтверждено. В 16 тестах, что составило 28 %, было установлено несоответствие результатов исследования уровня антител к ВГС наборами «Бест — анти ВГС» и Monolisa “Anti — НСV PLUS Version 2.
Витамин D
История
В 15 веке в Англии в крупных городах началась эпидемия рахита (дети с искривленным позвоночником, руками и ногами). Это было обусловлено нехваткой солнечного света из-за близкой застройки высоких домов, задымленностью воздуха.
В 1928г. немецкий ученый Виндаус получил Нобелевскую премию по химии за изучение свойств и строения витамина D.
Чем обусловлен дефицит витамина D
Дефицит витамина D у многих жителей России обусловлен:
Вы можете определить уровень витамина D в вашем организме, сдав соответствующий анализ:
Для любознательных
Витамин D объединяет группу витаминов (D1, D2, D3, D4, D5), из которых только две формы (D2 и D3) имеют важное биологической значение.
Предшественник витамина D, образует его запас в коже.
В коже из холестерола под действием бета-УФ лучей образуется 80% витамина D3. Его 20% поступают в организм с пищей животного происхождения (рыбий жир, печень, яичный желток).
Поступает в организм только с растительными продуктами (хлеб и др.)
Затем в печени из обеих форм в результате гидроксилирования (присоединении OH-группы) образуется
25-ОН-гидрокси-ХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛ (кальцидол). Эта форма является депо- и транспортной, именно ее определяют в крови для установления уровня витамина D.
1,25-ОН-дигидрокси-ХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛ (кальцитриол). Именно кальцитриол обеспечивает основные биологические эффекты витамина D в организме.
Основной биологической ролью кальцитриола (1,25-ОН-витамин D) является поддержание постоянного уровня кальция в крови (витамин D усиливает всасывание кальция в кишечнике и если его в крови недостаточно — обеспечивает поступление кальция из костей в кровь).
Со временем рецепторы к кальцитриолу помимо кишечника и костей были обнаружены в почках, половых органах, поджелудочной железе, мышцах, в клетках иммунной и нервных систем. Таким образом стало понятно, что в организме человека витамин D выполняет большое количество различных функций:
Недостаток витамина D
Недостаток витамина Д в организме может привести к развитию:
Достижение уровня витамтина D 50 нг/мл (125 нмоль/л) снижает риск развития: