Микроскопическая техника Гистологическая техника Гематоксилин Обзорные окрашивания Методы окраски тканей Окрашивание нервной ткани Окрашивание костной ткани Кровь: методы окраски Окрашивание азаном по методу Гейденгайна Микротом для парафиновых срезов МПС-2
При самых различных заболеваниях кроветворного аппарата (лейкозы, анемии, новообразования и пр.), как правило, приходится прибегать к окраске азур-эозиновыми смесями; из них наиболее часто в патологогистологической практике применяются краска Романовского-Гимза и азур II-эозин. Оба красителя по своему составу весьма сходны и процедура окрашивания ими одинакова. Для достижения хороших результатов основным и решающим моментом является свежесть материала. Погибшие или убитые экспериментальные животные должны быть вскрыты немедленно, а трупы умерших людей — по возможности не позднее 3—6 часов после смерти. Кроме того, следует строго соблюдать и целый ряд других условий:
1.Фиксация кусочков в ценкер-формоле; допускается и жидкость Орта как вполне полноценный в данном случае фиксатор.
Можно получать неплохие результаты и после формалиновой фиксации, но при условии хромирования срезов и притом лучше в комбинации с сулемой. Декальцинированные объекты мало пригодны для гематологических исследований.
2.Срезы готовят максимально тонкие (5 мкм) и лучше всего парафиновые.
3. Для разведения красителей и промывания препаратов (срезов и мазков) берут свежую дистиллированную воду, сохраняемую под натронной известью. В день работы требуемое количество дистиллированной воды следует прокипятить в течение 3—5 минут, охладить и плотно закрыть. Оптимальный pH воды для гематологических окрасок — 6,8—7,0.
4.Посуда для красителей и дистиллированной воды должна быть безукоризненно чистой.
5.Красящие растворы готовят перед самым употреблением, нельзя допускать даже самого непродолжительного стояния их. Как во время приготовления красящего раствора, так и в момент выливания его на срезы не должно быть выпадения осадков. Образование осадков делает краску негодной и зависит либо от качества ее (что особенно надо иметь в виду в отношении краски Романовского—Гимза), либо от дистиллированной воды и, наконец, от посуды.
Приготовленную красящую смесь нельзя лишний раз взбалтывать, не допускается даже передвигать посуду, в которой идет окрашивание; и то и другое способствует преждевременному выпадению красителя.
6.Окрашивание проводят в чашках Петри на стеклянных палочках или на обломках спичек срезами вниз. Можно окрашивать и в стаканчиках.
7.Во избежание преждевременного выцветания препаратов употребляют ксилол хорошего качества (не содержащий кислоты). Из различных сортов ксилола здесь может быть рекомендован орто-ксилол, как наиболее очищенный. По своей цене он значительно дороже обычного «чистого» кислола, представляющего собой смесь трех изомеров (мета, орто, пара) с преимущественным содержанием м-ксилола.
8.Учитывая необходимость исследования с иммерсионной системой, пользуются тонкими покровными стеклами, не толще 0,17 мм.
4. Основательно промывают в водопроводной воде. Срезы должны быть резко перекрашены, темно-синего цвета.
5. Дифференцируют в воде, подкисленной уксусной кислотой (из расчета 2-3 капли крепкой или ледяной уксусной кислоты на 200 мл воды) до тех пор, пока будут отходить грубые облачка синей краски (азур) и срез порозовеет. Обесцвечивание препарата идет быстро.
6. Основательно промывают в воде и доводят дифференцировку до конца одним чистым 96° спиртом, контролируя под микроскопом, пока отчетливо выделятся различные клеточные структуры. Хорошо дифференцированные срезы — бледно-синие с сиреневым оттенком.
7. Быстро проводят через абсолютный спирт, отжимают фильтровальной бумагой, просветляют ксилолом и заключают в бальзам. Применение абсолютного спирта необязательно.
Нельзя пользоваться карбол-ксилолом, креозотом и анилиновым маслом.
Можно употреблять эвкалиптовое, бергамотное и оригановое масла, но их надо тщательно удалять ксилолом.
Краску Романовского-Гимза в готовом виде.
ОКРАСКА АЗУР II-ЭОЗИНОМ
1. Срезы подготавливают так же, как и для окраски по способу Романовского—Гимза (см. пункт 1 метода Романовского-Гимза).
2. Готовят основные растворы из азура II и эозина (растворимого в воде), каждый из расчета 1 г на 1000 мл дистиллированной воды. Эти растворы довольно стойки и долго сохраняются (месяцами), но обязательно в темноте.
3. Непосредственно перед употреблением основные растворы красителей разводят дистиллированной водой следующим образом: берут 12 мл раствора эозина и доливают до 90 мл дистиллированной водой, а затем приливают 10 мл раствора азура II. Осторожно покачивая посуду, перемешивают смесь, получается раствор темно- фиолетового цвета.Готовую красящую смесь выливают на срезы. Следить за осадками.
4. Окрашивают в чашках Петри (на стеклянных палочках) или стаканчиках при комнатной температуре — 18—24 часа, а в термостате при 37° — 1—2 часа.
5. Промывают в водопроводной воде и дифференцируют как при окраске по способу Романовского—Гимза (см. пункты 5 и 6 метода Романовского—Гимза).
6. Быстро проводят через абсолютный спирт (необязательно), просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.
Методика окраски капризная. Как уже было отмечено выше, успех в основном определяется качеством дистиллированной воды, употребляемой для приготовления красящих растворов.
Ввиду возможных неудач желательно одновременно пускать в работу побольше срезов.
Готовые препараты хранят в темноте.
При хорошем качестве красителей препараты сохраняются многими годами, в противном случае они постепенно обесцвечиваются.
ОКРАСКА МАЗКОВ КРОВИ ПО РОМАНОВСКОМУ — ГИМЗА
Для приготовления мазков крови берут тщательно вымытые и обезжиренные предметные стекла. Каплю крови помещают на конец предметного стекла и размазывают ребром другого (шлифованного) стекла. Чтобы получить хороший мазок, узкое ребро шлифованного стекла ставят слева от капли, непосредственно соприкасаясь с ней, под углом в 45°. Выжидают, пока капля крови расплывется, и тогда легким быстрым движением справа налево размазывают каплю. Капля должна быть соответствующей величины, т. е. такой, чтобы при изготовлении мазка она была полностью и без остатка исчерпана. При всех манипуляциях, связанных с приготовлением мазка, предметные стекла следует держать только за ребра. Приготовленный мазок сушат, помахивая препаратом до момента исчезновения влажного блеска. Высохший мазок фиксируют в метиловом или чистом 96° спирте (в стаканчиках); в первом — 3—5 минут, во втором — 10—15 минут. По окончании фиксации препарат вынимают из спирта пинцетом, ставят вертикально на фильтровальную бумагу и ожидают испарения спирта.
1. Разводят продажную краску Романовского—Гимза из расчета 1—2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды и помещают в нее фиксированный мазок на 15—20— 30 минут (в зависимости от качества красителя). Окрашивают в стаканчиках или чашках Петри.
2. Основательно промывают в дистиллированной воде и просушивают фильтровальной бумагой.
Препарат исследуют с иммерсионной системой.
Можно заключать в бальзам, тогда каплю последнего кладут на хорошо высушенный мазок и покрывают покровным стеклом (не толще 0,17 мм).
Посуда, в которой приготовляют красящий раствор и окрашивают мазки, должна быть безукоризненно чистой. Краску готовят по мере надобности и на свежей дистиллированной воде.
Есть и другие очень хорошие способы окраски кровяных мазков, как, например, Май—Грюнвальда, Лейшмана, Паппенгейма, описание которых можно найти в различных курсах по микроскопической технике (С. П. Шуенинов, 1916; С. С. Вайль, 1947; Ромейс, 1953, и др.). В отношении результатов окраски все они сходны между собой и с краской Романовского-Гимза.
Окрашивание по Паппенгейму
Предварительная фиксация мазков не требуется. На подсохшие на воздухе мазки наливают краску-фиксатор Мая —Грюнвальда на 3 мин. Не сливая краску, к ней добавляют такое же количество дистиллированной воды. Через 1 мин краску с мазка сливают и, не ополаскивая его, наливают профильтрованный рабочий раствор (разведение 1:4) готовой краски Романовского —Гимзы (при pH 6,8) на 5 мин. После окрашивания препараты промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе, устанавливая вертикально в специальной сушке.
Для приготовления краски-фиксатора Мая—Грюнвальда 250 мг порошка Мая—Грюнвальда растворяют в 100 мл метилового спирта. Раствор подогревают при 70 °С на водяной бане да полного растворения порошка, фильтруют и хранят в бутылке с притертой пробкой.
Окрашивание по Паппенгейму в модификации Н. Ю. Полонской
Готовят 0,3% раствор красителя Мая—Грюнвальда (300 мг порошка красителя растворяют в 100 мл метилового спирта; раствор созревает 3 дня), раствор азура II (1 г растворяют в 1000 мл кипящей воды), раствор эозина калия или натрия (1 г эозина калия или 0,5 г эозина натрия растворяют в 1000 мл кипящей воды).
Высушенные мазки фиксируют в метиловом спирте 3 мин. Затем окрашивают 0,3% раствором Мая — Грюнвальда, на одну часть которого добавлено четыре части фосфатного буфера (pH 6,8 —7,2), 10 мин. Докрашивают азурэозином (одна часть раствора азура на одну часть раствора эозина и 5 частей фосфатного буфера при pH 6,8 —7,2) 20 мин. Смывают краситель проточной водой. Высушивают мазки на воздухе.
Окрашивание мазков по Лейшману
Готовят краску Лейшмана (2,5 г сухого красителя на 1 л метилового спирта; краситель созревает 3 — 4 дня), азур (1 г сухого красителя на 1 л дистиллированной воды, краситель созревает 3—4 недели); эозин (1 г сухого красителя на 1 л дистиллированной воды, краситель созревает 3-недели).
Высушенный на воздухе мазок переносят на 3 мин в краситель Лейшмана, промывают в водопроводной воде.
Удаляют (стряхивают) избыток воды и заливают красителем, в состав которого входят 40 мл азура, 30 мл эозина и 70 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 30-40 мин. Промывают водопроводной водой. Высушивают на воздухе или промокают фильтровальной бумагой.
Срочное окрашивание по Алексееву
Тонкие мазки фиксируют в подогретом до 35—40 °С растворе Мая— Грюнвальда 30 с.
Ополаскивают в воде.
Окрашивают в 0,1 % растворе азур- эозина (2:1) 2 мин.
Ополаскивают в воде и высушивают, промокая.
Окрашивание по Папаниколау и его модификации
Влажный препарат фиксируют в смеси Никифорова в течение 30 мин.
Если после фиксации его залить глицерином на 2 ч, то потом препарат можно хранить до 14 дней.
Перед окрашиванием препарат проводят через спирты нисходящей концентрации (100%, 95%, 80%, 50%) и дистиллированную воду (в каждом стаканчике держат по 2 мин).
Окрашивают гематоксилином в течение 10 мин (перед использованием раствор красителя необходимо фильтровать).
Промывают в 3-х сменах дистиллированной воды.
Затем переносят в смесь из 97 мл 70 % спирта и 3 мл концентрированного раствора аммиака (препарат становится синим). В этой смеси препарат необходимо ополоснуть несколько раз.
Опускают в 70 % спирт и затем промывают в проточной воде.
Опускают в раствор карбоната лития на 1 мин (3 капли насыщенного водного раствора на 100 мл дистиллированной воды). Промывают в проточной воде 5 мин.
Обезвоживают (дистиллированной водой и спиртами восходящей концентрации — 50 %, 70 %, 80 %, 100 %).
Докрашивают в течение 4 мин в оранжевом G (готовый раствор).
Ополаскивают в двух сменах 95 % спирта.
Опускают в краситель Папаниколау на 1 — 2 мин.
Ополаскивают в трех сменах 95 % спирта и двух сменах 100 % спирта (в последней смене держат 5 мин).
Просветляют в ксилоле, заключают в бальзам.
Красители приготавливают следующим образом.
Раствор 1: 1 г кристаллического гематоксилина растворяют в 10 мл 100% спирта.
Раствор 2: 20 г алюмокалиевых квасцов при нагревании растворяют в 200 мл дистиллированной воды.
Через 24 ч растворы 1 и 2 смешивают и добавляют 0,5 г оксида ртути (красного), нагревают до кипения и охлаждают на водяной бане. Через 24 ч отфильтрованный раствор может быть использован. Каждый раз перед применением его следует фильтровать.
Краситель Папаниколау приготавливают следующим образом. Смешивают 45 мл 1,5 % раствора светлого зеленого (лихтгрюн) в 95 % спирте, 10 мл 0,5 % раствора основного коричневого (бисмаркбраун) в 95 % спирте, 45 мл 0,5 % раствора эозина в 85 % спирте, 0,2 г фосфорномолибденовой кислоты и добавляют одну каплю насыщенного водного раствора карбоната лития (1 г на 100 мл дистиллированной воды).
Отечественные цитологи предлагают модификацию метода, в которой светлый зеленый заменен на более доступный бриллиантовый зеленый.
Окрашивание по Папаниколау в модификации Куницы
Оранжевый G: смешивают раствор 0,5 г оранжевого G на 100 мл 96 % спирта и 0,015 г фосфорно-молибденовой кислоты. Полученный раствор оставляют на 1 сут, после чего он годен для использования.
Чтобы приготовить промежуточный краситель и бриллиантовый зеленый, необходимо за 1 сут приготовить следующие водные растворы:
основного коричневого — 0,1 г на 1 л дистиллированной воды;
эозина (желтого или обычного) — 0,1 г на 1 л дистиллированной воды;
бриллиантового зеленого — 0,05 г на 1 мл дистиллированной воды + 1 мл 96 % спирта.
Эти растворы необходимо плотно закрыть на 1 сут в термостате при 37 °С. Далее на них готовят спиртовые растворы красителей.
Промежуточный краситель: основной коричневый — 1 мл водного раствора на 200 мл 96 % спирта (если эозин обычный — 1 мл водного раствора на 260 мл 96 % спирта). Для получения промежуточного красителя, представляющего собой смесь, берут следующие количества вещества на 100 мл смеси: 16 мл спиртового раствора основного коричневого, 84 мл спиртового раствора эозина (желтоватого или обычного), 0,17 г фосфорно-молибденовой кислоты и добавляют одну каплю насыщенного раствора карбоната лития.
Красители фильтруют перед смешиванием, остаток хранят непрофильтрованным.
Промывают в 96 % спирте, а затем дистиллированной воде.
Окрашивают гематоксилином 2 — 3 мин, промывают в воде.
Дифференцируют 0,5 % раствором соляной кислоты до покраснения в течение 2 — 3 мин, сливают, промывают в воде. Контролируют под микроскопом окраску ядер.
Опускают на 1 мин в слабый раствор карбоната лития (три капли насыщенного водного раствора лития на 100 мл дистиллированной воды), промывают в воде.
Тщательно обезвоживают мазок 96 % спиртом.
Окрашивают оранжевым G в течение 1 мин, наливая краситель на стекло. Сливают краситель и хорошо промывают спиртом до удаления его избытка.
Красят промежуточным красителем 1 мин, сливают, промывают в спирте.
Вначале готовят водные растворы цитоплазматических красок: по 0,1 г светлого зеленого, эозина желтоватого водорастворимого и основного коричневого растворяют отдельно в 1 мл воды. Водные растворы, хорошо закрыв, оставляют на 1 сут в термостате при 37 °С. Затем из водных растворов готовят спиртовые растворы красителей:
основной коричневый — 0,25 мл водного раствора на 200 мл 96 % спирта.
После этого готовят смесь, которую Г. Папаниколау назвал ЕА-36. Она состоит из смеси спиртовых растворов красителей: 200 мл светлого зеленого, 168 мл эозина желтоватого и 32 мл основного коричневого, которые перед смешиванием фильтруют. К смеси добавляют 0,68 — 0,8 г фосфорно-молибденовой кислоты и четыре капли насыщенного водного раствора карбоната лития.
В растворе красителя образуется небольшое количество устойчивого осадка, не мешающего работе. Полной готовности краска достигает через 3—12 дней при комнатной температуре.
Для приготовления оранжевого G 0,5 г сухого вещества растворяют в 100 мл 96 % спирта и добавляют 0,02 — 0,05 г фосфорно-молибденовой кислоты. Полученный насыщенный раствор готов к применению на следующий день. После того как использован весь раствор красителя, в эту же посуду с осадком можно добавить 100 мл 96 % спирта и указанное количество фосфорно-молибденовой кислоты. Оставшиеся количества спиртовых растворов эозина желтоватого и основного коричневого хранят и используют для приготовления красителя 3 — 6 мес.
Мазки фиксируют в жидкости Никифорова 30 мин.
Промывают в 96 % спирте 1 мин, затем в дистиллированной воде 2 — 3 мин.
Окрашивают в растворе гематоксилина 3 — 8 мин.
Ополаскивают в проточной воде 3 — 5 мин.
Проводят через 0,5 % раствор соляной кислоты 1 мин.
Промывают 2 — 3 мин в дистиллированной воде и 3 — 5 мин — в проточной, контролируя процесс под микроскопом.
Переносят в 0,1 % раствор карбоната лития на 1 мин.
Ополаскивают в дистиллированной воде и 96 % спирте.
Переносят в 100 % спирт на 1 мин.
Окрашивают в растворе оранжевого G 1 — 3 мин.
Проводят через 96 % спирт в течение 2 мин, контролируя процесс под микроскопом.
Окрашивают в светлом зеленом (смесь ЕА-36) 2 мин.
Проводят через 96 % спирт 1 — 3 мин.
Промокают фильтровальной бумагой, проводят через ксилол, заключают в бальзам.
Применяют следующийвариант окрашивания гематоксилином и эозином для мазков.
Для приготовления красителя 50 г алюмокалиевых квасцов растворяют в 500 мл дистиллированной воды, доводят до кипения и высыпают в горячий раствор 1 г гематоксилина. Затем добавляют 500 мл дистиллированной воды и доводят до кипения (но не кипятят). Раствор остужают до комнатной температуры и добавляют йодат калия. Горло сосуда завязывают марлей и оставляют созревать на свету 5 недель. Затем сосуд с красителем закупоривают и убирают в темное место. Перед использованием краситель фильтруют.
Мазки фиксируют в смеси равных частей эфира и 96 % спирта или в 96 % спирте 7—10 мин.
Окрашивают в гематоксилине 5 мин.
Промывают в проточной воде 1 — 2 мин.
Окрашивают в 0,3% спиртовом растворе желтоватого эозина 1 мин.
Методическое пособие по практическим навыкам для студентов, обучающихся на кафедре гистологии. Практические навыки получаемые на кафедре гистологии
Главная > Методическое пособие
Информация о документе
Дата добавления:
Размер:
Доступные форматы для скачивания:
1.1.3. Методы окрашивания гистологических препаратов
1.1.3.1. Типы красителей
Все красители, используемые в гистологической технике, подразделяются на 3 типа.-
Кислоты и кислые соли :
а) Окрашиваемые структуры называются оксифильными (имеющими сродство к кислым красителям).
б) Это белковые компоненты цитоплазмы и неклеточные структуры (коллагеновые волокна).
Смесь двух красителей:
основного (азур 2) и кислого (эозин).
б) Ядра всех клеток окрашиваются азуром 2.
Суданом окрашиваются жировые капли (в которых он растворяется).
Существует большое количество различных способов окраски. Те из них, которые встречаются в нашем курсе, перечислены ниже.
1.1.3.2. Общие методы окраски
1.а) Самый распространённый метод окраски. б) Сочетает основной и кислый красители. в) Поэтому позволяет выявить почти все клетки и многие неклеточные структуры.
3. Замечание: используемый гематоксилин готовится по методу Эрлиха: окисляется до гематеина калийными квасцами.
2. Окраска железным гематоксилином (по методу Генденгайна)
1. Препарат предварительно обрабатывают (протравляют) железноаммиачными квасцами, а потом обрабатывают гематоксилином.
2. Структуры приобретают коричневато-серый цвет.
3. Хорошо выявляются структуры ядра, границы клеток, мышечные волокна.
1. Краситель является трёхцветным: это смесь кислого фуксина, анилинового синего, оранжевогo G, а также двух кислот.
4. Окраска орсеином
5. Окраска гематоксилин- пикрофуксином
6. Окраска по методу Шморля
1. Используется для окраски костей и дентина.
3. а) Стенки костных полостей и канальцев (выстланные сетью коллагеновых волокон) окрашиваются в тёмно-коричневый цвет;
1.1.3.4. Окраска клеток соединительной ткани и крови
1. Окраска азур 2 – эозином
2. Окраска мазков по методу Романовского
б) Отличия же от приготовления срезов таковы:
А. фиксацию мазков проводят чистым метанолом; Б. окрашивание продолжают всего 30-45 мин, а не 12-14 ч; В. для заключения под покровное стекло используют кедровое масло, а не канадский бальзам.
1.1.3.5. Выявление элементов нервной системы
1.Импрегнация нитратом серебра
2. При окрашивании срез последовательно обрабатывают растворами азотнокислого серебра, формалина, аммиачного серебра.
2. Окраска толуидиновым синим по методу Ниссля
2. С его помощью в цитоплазме нервных клеток обнаруживаются глыбки базофильного вещества (т.н. субстанция Ниссля).
3. Окраска метиловым зелёным- пиронином по методу Браше
1. Метод служит для выявления РНК.
2. а) Как и предыдущий метод, относится к гистохимическим методам исследования. б) Поэтому подробней описывается ниже.
1.1.4. Гистохимические методы исследования
а) Гистохимические методы основаны на специфической реакции между химическим реактивом и определённым компонентом препарата. б) Образующийся продукт реакции имеет окраску, отличную от окраски исходного реактива.
2. а) А. Пиронин специфически окрашивает РНК в красный цвет. Б. Поэтому на препарате ядрышки (в составе ядра) и рибосомбогатые участки цитоплазмы имеют красный цвет.
3. Обычно делают и контрольный препарат, который перед окрашиванием обрабатывают рибонуклеазой.
2. ДНК-содержащие структуры окрашиваются в пурпурно-красный цвет.
Используются различные реакции; в том числе:
2. Периодат способствует образованию в субстрате альдегидной группы, которая взаимодействует с реактивом Шиффа.
3. На препарате ШИК-положительные компоненты (например, гранулы гликогена) имеют тёмно-красный цвет.
3б) Гликозамин- гликаны
Реакция с толуидиновым синим.
Реакция с суданом III (о которой уже упоминалось).
Капли жира в жировой клетке окрашиваются в яркий оранжево-красный цвет благодаря растворению в них красителя.
1.1.5. Просмотр препаратов
1. На снимке мы видим внутреннюю поверхность тонкой кишки с находящимися на ней кишечными ворсинками (1).
б) Цитоплазма (3) оксифильна и окрашена эозином в розовый цвет.
уплотнение материала и приготовление среза (с последующим освобождением от уплотнителя).
в) Остаются фиксация, окраска и заключение в консервирующую среду.
2. а) Жировые клетки на препарате заполнены крупными каплями жира (1), которые окрашены суданом Ш в ярко-оранжевый цвет.
б) Клеточные ядра (2), окрашенные гематоксилином в фиолетовый цвет, оттеснены к периферии клетки.
1. В процессе изготовления препарата костный материал подвергнут декальцинации (п. 1.1.3.3).
2. Применённый метод окраски позволяет выявить стенки костных полостей (1) и канальцев (2), окрашивающиеся в тёмно-коричневый цвет благодаря высокому содержанию здесь коллагеновых волокон.
1. В методе Маллори используются 3 красителя (п. 11.3.3), что делает картину многоцветной.
1.2. Электронная микроскопия
1.2.1. Принцип работы электронного микроскопа
1. В электронном микроскопе образец облучается не видимым светом, а пучком электронов. Длина же электронной волны значительно меньше, чем световой. Соответственно, такая волна “чувствует” меньшие препятствия: разрешающая способность микроскопа оказывается выше.
2. Конструктивная же особенность состоит в том, что в электронном микроскопе в качестве линз используются электромагнитные катушки.
3. Ход лучей в электронном микроскопе, в принципе, таков же, как в световом.-
а) Источником электронов служит катод (1),
б) Анод расположен вблизи катода и имеет отверстие посередине, через которое проскакивают электроны.
в) Чтобы их поток далее не ослабевал, в тубусе микроскопа создаётся высокий вакуум.
5. Лучи, проходящие через последнюю катушку, попадают далее на люминесцентный экран (7) и вызывают его свечение в месте падения электронов.
1.2.2. Особенности приготовления препарата
1. Взятие материала и фиксация
Материал берут очень маленькими кусочками (порядка 1 мм 3 ), а фиксацию осуществляют обычно в 2 стадии:
2. Уплотнение материала
2. а) Заливку производят в специальных формах, б) затвердевание смеси происходит путём её полимеризации в термостате, в) и затвердевшие блоки имеют вид маленьких свечей.
3. Приготовление срезов
2. Затем их переносят на сеточки (играющие роль предметного стекла).
4. Окрашивание срезов
1. а) Окрашивание срезов сводится к их контрастированию с помощью солей тяжёлых металлов (свинца, вольфрама, урана). б) Эти соли осаждаются на фосфолипидах мембран и поглощают электроны.
2.Поэтому соответствующие места клетки выглядят более тёмными.
