Антисыворотка и сыворотка в чем разница
Разница между Сывороткой и Антисывороткой
Основное различие между Сывороткой и Антисывороткой заключается в том, что Сыворотка представляет собой желтоватый жидкий компонент крови без клеток крови и факторов свертывания, тогда как Антисыворотка представляет собой обогащенную антителами сыворотку, полученную от иммунизированного животного или человека.
Кровь — это специализированная жидкость организма, которая циркулирует по всему телу, доставляя необходимые вещества, такие как кислород и питательные вещества, в клетки организма, одновременно удаляя углекислый газ и метаболические отходы из клеток организма. Кровь содержит несколько компонентов, таких как эритроциты, плазма, лейкоциты и тромбоциты. Плазма представляет собой желтоватую окраску жидкой части крови, включая факторы свертывания крови.
Сыворотка — это плазма без факторов свертывания. Следовательно, сыворотка не сгущается и не сворачивается. Она содержит воду и другие растворенные вещества, такие как электролиты, гормоны, антитела и т.д. Антисыворотка — это еще один вид сыворотки, которую получают от иммунизированного человека или животного. Она богата антителами против определенного антигена. Антисыворотка обеспечивает пассивный иммунитет.
Содержание
Что такое Сыворотка?
Сыворотка — это жидкая часть крови после коагуляции. С ыворотка крови — это та часть крови, которая не имеет факторов свертывания крови.
Сыворотка
Проще говоря, сыворотка — это плазма крови без факторов свертывания. Следовательно, объем сыворотки меньше по сравнению с плазмой крови. Кроме того, сыворотка не содержит фибриногена. Извлекают сыворотку из крови с помощью центрифугирования коагулированной крови. Основным компонентом сыворотки является вода. Она также содержит электролиты, антитела, антигены, минералы, растворенные белки, гормоны, углекислый газ и т.д.
Как правило, плотность сыворотки составляет 1,024 г/мл. Это та часть крови, которая используется для определении групп крови а также различных заболеваний крови.
Что такое Антисыворотка?
Антисыворотка представляет собой богатую антителами сыворотку, полученную от иммунизированного животного или человека. Она содержит антитела против определенного антигена. Антиген может быть инфекционным организмом или ядовитым веществом. Антисыворотка обеспечивает пассивный иммунитет к конкретному заболеванию или яду за счет получения предварительно сформированных антител против определенного антигена. Животные, такие как лошадь, овца и кролик, часто используются для извлечения антисыворотки. Однако человеческая антисыворотка более ценна, чем животная, поскольку она не вызывает аллергии и т.д.
Наиболее распространенным применением антисыворотки у людей является лечение от укуса змеи как противоядия. Кроме того, антисыворотка применяется в качестве антитоксина.
Каковы сходства между Сывороткой и Антисывороткой?
В чем разница между Сывороткой и Антисывороткой?
Заключение — Сыворотка против Антисыворотки
Сыворотка — это плазма крови без факторов свертывания. Это жидкость желтоватого цвета, отделенная при центрифугировании свернутой крови. С другой стороны, антисыворотка представляет собой обогащенную антителами сыворотку, выделенную от иммунизированного животного или человека. Она богата определенными антителами, произведенными против определенного антигена. Антисыворотка применяется для пассивной иммунизации.
Научная электронная библиотека
Морозова В. С., Габрильянц О. А., Мягкова М. А.,
3.1.2. Антитела в ИХМ
В ИХМ используются специфические, или диагностические антитела для распознавания анализируемого антигена. Получают специфические антитела с помощью различных лабораторных животных (кролик, коза, овца, лама, курица, мышь). Для этого животное иммунизируют антигеном, к которому необходимо получить специфичные антитела, либо модифицированным антигеном, дающим наилучший иммунный ответ. Например, низкомолекулярные вещества обладают слабой иммуногенностью (способностью вызывать иммунный ответ), поэтому для иммунизации используют конъюгат аналога определяемого вещества с белком-носителем. Соединение (субстанция, конъюгат), используемый для иммунизации и вызывающий в организме животного иммунный ответ, называется иммуногеном. Часто для усиления иммунного ответа животным вместе и иммуногеном вводят адъювант – специальный реагент, активирующий иммунную систему.
Процесс получения специфических антител в ИХМ является длительным и многостадийным. Основные стадии этого процесса, на каждой из которых происходит подбор условий и оптимизация процесса:
1. Подбор структуры и синтез иммуногена (конъюгата).
2. Иммунизация животного:
● вид иммунизируемого животного;
● форма представления антигена (с адъювантом или без него);
● способ введения антигена реципиенту, доза и сроки.
3. Получение и характеризация сыворотки.
4. Очистка (выделение) антител, либо получение моноклональных Ат.
Одной из основных характеристик антител является их аффинность. По аффинностью понимают силу связывания активного центра молекулы антитела с соответствующей детерминантой антигена.
Другой важной характеристикой антител (антисыворотки) является специфичность. Под специфичностью антител понимают способность антител отличать иммуноген от любого другого антигена (замена).
Специфичность получаемых при иммунизации антител к гаптену прежде всего зависит от структуры конъюгированного антигена гаптен – носитель. Другими словами, используя иммуногены различной структуры, можно получать антитела как высокоспецифичные, т.е. узнающие только определяемое вещество (или вещество и самые близкие к нему по структуре соединения), так и антитела с широким спектром специфичности, способные реагировать с родственными соединениями, например, с метаболитами.
В ИХМ используются 2 типа антител – моноклональные и поликлональные. Поликлональные антитела – антитела, образующиеся в сыворотке крови в разных клонах B-лимфоцитов и связывающиеся с различными антигенными детерминантами (эпитопами) молекулы-мишени (антигена). Смесь антител, выделенную из сыворотки крови, называют поликлональным препаратом. Для получения поликлональных антител используются различные иммунизированные животные (чаще всего кролики).
Использование поликлональных антител имеет два недостатка, существенных для некоторых методов диагностики:
● содержание отдельных антител в поликлональном препарате может варьировать от одной партии к другой;
● поликлональные антитела нельзя применять, если необходимо различить две подобные мишени, например, когда патогенная (мишень) и непатогенная (не-мишень) формы различаются единственной детерминантой; либо когда нужно различить два вещества из одной группы.
Для реализации вышеприведенных целей были разработаны препараты антител, специфичные к одной определённой антигенной детерминанте, то есть препараты моноклональных антител. Моноклональные антитела – антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной плазматической клетки-предшественницы. Моноклональные Ат характеризуются одной константой аффинности и узкой специфичностью. Все молекулы моноклональных Ат и, соответственно, структуры их центров связывания, являются идентичными.
Моноклональные Ат успешно применяются для создания узкоспецифи ческих тест-систем, способных опреде-лять индивидуальное вещество или узкий круг близкородственных веществ.
Например, с использованием моноклональных Ат разработаны тест-системы для определения героина (не специфичные к морфину, кодеину), экстази (неспецифичные к близким по структуре амфетамину и метамфета-мину).
Получение моноклональных Ат является длительным высокотехнологичным процессом. В данном случае в качестве иммунизируемых животных используются мыши. У иммунизированных мышей, давших хороший иммунный ответ к введенному иммуногену, отбирают лимфоузлы, содержащие большое количество B-лимфоцитов. Их смешивают с линией миеломных (раковых) клеток, которые потеряли способность синтезировать свои собственные антитела, после чего происходит гибридизация – образование гибридных клеток, интенсивно синтезирующих нужное антитело. Затем клоны гибридных клеток тести-руют, отбирают один или несколько клонов, синтезирующих Ат с нужной специфичностью, и клонируют уже отобранный нужный клон. В результате можно наработать большое количество антител заданной специфичности.
В различных вариантах ИХМ могут использоваться как поликлональные, так и моноклональные антитела, в зависимости от поставленной задачи.
Рис. 8. Схема получения моноклональных антител
В гетерогенных форматах ИХМ используется еще один вид антител – антивидовые Ат. Антивидовые антитела (т.е. антитела против вида животных) – это антитела, полученные против антител животного другого вида. Например, есть антитела «овца против кролика», «кролик против мыши», «кролик против человека» и др. Это означает, что нормальными антителами животного, против которого хотят получить антивидовые Ат, иммунизируют животное другого вида. В результате получают иммунный ответ на любые Ат первого вида. Антивидовые Ат удобно использовать для получения универсального меченого реагента – например, конъюгата с ферментом. Такой конъюгат можно использовать для выявления иммунных комплексов с антителами любой специфичности, полученных у данного вида животного. Т.е., например, для ИФА наркотических веществ любого класса можно использовать один меченый ферментом реагент (см. раздел Иммуноферментный анализ).
Иммунологические методы исследования в лабораторной практике
Преимущества иммунологического метода исследования.
Серологические реакции различаются по способности выявлять отдельные классы антител. Реакция агглютинации, например, хорошо выявляет lgM-антитела, но менее чувствительна для определения lgG-антител. Реакции связывания комплемента и гемолиза, которые требуют участия комплемента, не выявляют антитела, не присоединяющие комплемент, например lgA-антитела и lgE-антитела. В реакции нейтрализации вирусов участвуют лишь антитела, направленные против антигенных детерминант поверхности вириона, связанных с патогенностью. Чувствительность иммунулогических методов превосходит все другие методы исследования антигенов и антител, в частности радиоиммунный и иммуноферментный анализы позволяют улавливать присутствие белка в количествах, измеряемых в нанограммах и даже в пикограммах.
С помощью предложенного способа определяют группу и проверяют безопасность крови (гепатит В и ВИЧ-инфекция). При трансплантации тканей и органов, иммунологический метод позволяет определять совместимость тканей и тестировать методы подавления несовместимости. В судебной медицине используют реакцию Кастеллани для определения видовой специфичности белка и реакцию агглютинации для определения группы крови.
Иммунологические методы широко применяют в лабораторной диагностике инфекционных болезней. Этиологию заболевания устанавливают также на основании прироста антител к возбудителю в сыворотке крови реконвалесцента по сравнению с пробой, взятой в первые дни болезни. На основе исследования изучают иммунитет населения по отношению к массовым инфекциям, например к гриппу, а также оценивают эффективность профилактических прививок.
Развитию иммунологических методов способствовало создание моноклональных антител, продуцируемых гибридомой, полученной в результате слияния иммунокомпетентной клетки В-лимфоцита и клетки миеломы мышей. Моноклональные антитела несут только одну химически однородную популяцию антител, комплементарную специфической детерминанте антигена, что позволяет осуществлять тонкую дифференциацию белков. Развитие иммунологического метода исследования идет как по линии совершенствования реагентов (чистоты антигенов и антител), так и по линии создания автоматизированных систем постановки реакций и их инструментального учета.
Виды реакций метода иммунологического исследования.
В зависимости от их механизма и учета результатов, иммунологический метод исследования можно подразделить на 5 видов реакции.
1.Реакции, основанные на феномене агглютинации.
Агглютинация представляет собой склеивание клеток или отдельных частичек — носителей антигена с помощью иммунной сыворотки к этому антигену.
Реакция агглютинации бактерий с использованием соответствующей антибактериальной сыворотки относится к наиболее простым серологическим реакциям. Взвесь бактерий добавляют к различным разведениям испытуемой сыворотки крови и через определенное время контакта при t 37° регистрируют, при каком наивысшем разведении сыворотки крови происходит агглютинация. Реакцию агглютинации бактерий используют для диагностики многих инфекционных болезней: бруцеллеза, туляремии, брюшного тифа и паратифов, бациллярной дизентерии, сыпного тифа.
Реакции агглютинации для определения группы крови и резус-фактора основаны на взаимодействии аллоантител (изоантител) и антигенов эритроцитов. Антитела против резус-фактора являются неполными, они не способны к прямой реакции с резус-положительными эритроцитами, поэтому для их обнаружения используют реакцию Кумбса, основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток. К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, а вслед за этим антиглобулиновую сыворотку против lgG (непрямая реакция Кумбса). Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против lgG, и происходит агглютинация эритроцитов.
Реакция пассивной или непрямой гемагглютинации (РПГА, РНГА). В ней используют эритроциты или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса), на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела. Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами, называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов.
Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на феномене предотвращения (торможения) иммунной сыворотки гемагглютинации эритроцитов вирусами, используется для выявления и титрования противовирусных антител. Она служит основным методом серодиагностики гриппа, кори, краснухи, эпидемического паротита, клещевого энцефалита и других вирусных инфекций, возбудители которых обладают гемагглютинирующими свойствами, например, для серодиагностики клещевого энцефалита, в лунки панели разливают двукратные разведения сыворотки больного на щелочном боратном буферном растворе. Затем добавляют определенное количество, обычно 8 АЕ (агглютинирующих единиц), антигена клещевого энцефалита и после 18 ч экспозиции при t 4° вносят взвесь гусиных эритроцитов, приготовленную на кислом фосфатно-буферном растворе. Если в сыворотке крови больного есть антитела к вирусу клещевого энцефалита, то антиген нейтрализуется и агглютинация эритроцитов не происходит.
2.Реакции, основанные на феномене преципитации.
Преципитация происходит в результате взаимодействия антител с растворимыми антигенами. Простейшим примером реакции преципитации является образование в пробирке непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело. Широко применяют различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлетрофорез), которые носят одновременно качественный и количественный характер. В результате свободной диффузии, в геле антигенов и антител в зоне оптимального их соотношения образуются специфические комплексы — полосы преципитации, которые выявляют визуально или при окрашивании. Особенностью метода является то, что каждая пара антиген-антитело формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител.
Для постановки двойной иммунодиффузии наливают слой растопленного геля на стеклянную пластинку и после затвердевания вырезают лунки диаметром 1,5–3 мм. В расположенные по кругу лунки помещают исследуемые антигены, а в центральную лунку — иммунную сыворотку известной специфичности. Диффундируя навстречу друг другу, гомологичные сыворотки и антигены образуют преципитат.
При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини), иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой, вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр которых пропорционален концентрации антигена. Метод используют для определения классов иммуноглобулинов, а модификации метода можно применять для определения противомикробных антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов.
Иммуноэлектрофорез основан на усилении миграции в геле антигенов и антител путем помещения пластины геля с реагентами в электрическое поле. При этом достигается разделение антигенов и антител на компоненты в соответствии с их подвижностью и зарядом.
Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез. В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против lgG-антител, которая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген-антитело обнаруживает методом авторадиографии.
3.Реакции с участием комплемента.
В качестве комплемента используют свежую сыворотку крови морской свинки, основанную на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам.
Реакция связывания комплемента (РСК) позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген-антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами барана (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов, гемолиза не наблюдается. Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана), вирусных и бактериальных инфекций.
Реакция радиального гемолиза эритроцитов может протекать в геле. Взвесь эритроцитов барана помещают в агарозный гель с комплементом; в застывшем на стекле слое делают лунки и вносят в них гемолитическую сыворотку. Вокруг лунок в результате радиальной диффузии антител образуется зона гемолиза, радиус которой прямо пропорционален титру сыворотки. Если сорбировать на эритроцитах какой-либо антиген, например гликопротеиновый гемагглютинин вируса гриппа, краснухи или клещевого энцефалита, то можно воспроизвести феномен гемолиза иммунными сыворотками к этим вирусам. Реакцию радиального гемолиза в геле применяют в диагностике вирусных инфекций. Она характеризуется простотой постановки, нечувствительностью к сывороточным ингибиторам, позволяет титровать сыворотки крови по диаметру зоны гемолиза, не прибегая к серийным разведениям.
Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (СЗ). Если к антигену (бактериям, вирусам и др.) добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген-антитело, покрытый СЗ-компонентом комплемента. Эту реакцию применяют при изучении ряда вирусных инфекций (клещевого энцефалита, денге), которые сопровождаются иммунопатологическими процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.
Основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры, патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.
5.Реакции с использованием химических и физических меток (ИФА).
Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченых флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченое флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген-антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства, отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате, в цитоплазме нервных клеток выявляются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.
Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции, основанный на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t 37° для образования иммунных комплексов, а затем, после отмывания несвязавшихся реагентов, выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.
Иммунофлюоресценцию широко используют не только в бактериологии, вирусологии, паразитологии, но и в иммунопатологии для обнаружения антител к тканевым антигенам человека.
Иммуноферментные или энзим-иммунологические методы основаны на использовании антител, конъюгированных с ферментами, главным образом пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Чтобы обнаружить соединение меченых антител с антигеном, добавляют субстрат, разлагаемый присоединенным к lgG ферментом, с окрашиванием в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфатаза) цвет. Используют также ферменты, разлагающие не только хромогенный, но и люмогенный субстрат. В этом случае при положительной реакции появляется свечение. Подобно иммунофлюоресценции, иммуноферментный метод применяют для обнаружения антигенов в клетках или титрования антител на антигенсодержащих клетках.
Наиболее популярной разновидностью иммуноферментного метода является иммуносорбция. На твердом носителе, которым могут быть целлюлоза, полиакриламид, декстран и различные пластмассы, сорбируют антиген. Чаще носителем служит поверхность лунок микропанелей. В лунки с сорбированным антигеном вносят исследуемую сыворотку крови, затем меченую ферментом антисыворотку и субстрат. Положительные результаты учитывают по изменению цвета жидкой среды. Для обнаружения антигенов, на носитель сорбируют антитела, затем вносят в лунки исследуемый материал и проявляют реакцию меченой ферментом антимикробной сывороткой. Повышению чувствительности иммунофлюоресцентного и иммуноферментного методов способствует введение в систему реакции авидина и биотина.
Радиоиммунологический метод основан на применении радиоизотопной метки антигенов или антител. Является наиболее чувствительным методом определения антигенов и антител, используется для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов. Первоначально он был разработан как специфический метод измерения уровня циркулирующих в крови гормонов. Тест-системой являлись меченый радионуклидом гормон (антиген) и антисыворотка к нему. Если к такой антисыворотке добавить материал, содержащий искомый гормон, то он свяжет часть антител, при последующем внесении меченого титрованного гормона с антителами свяжется уменьшенное по сравнению с контролем его количество. Результат оценивают по сопоставлению кривых связанной и несвязанной радиоактивной метки. Эта разновидность метода носит название конкурентной реакции. Существуют и другие модификации радиоиммунологического метода.
Иммуногистологические методы предназначены для определения антигенов на поверхности или внутри клетки, например для обнаружения маркеров лимфоцитов и иммунокомплексов при гломерулонефритах и других заболеваниях почек. В этой реакции для выявления антигенов пользуются или иммунофлюоресценцией, или иммуноферментными конъюгатами с пероксидазой. Количество специфических антигенов определяют по интенсивности окрашивания. Иногда используют автоматическую регистрацию с помощью спектрофотометра.